[发明专利]一种快速检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13方法

权利要求书

1.一种用于快速检测新型冠状病毒的检测试剂盒，其特征在于：包括250nM LwaCas13a蛋白、200nM EiCsm6蛋白、20uM Csm6活化剂、2.5uM LwaCas13a-crRNA、RNase抑制剂、反应缓冲液、20uM RNA报告基团LF-Reporter；所述反应缓冲液为40mM Tris-HCl、60mM NaCl、6mM MgCl₂的混合液，pH为7.3；其中，LwaCas13a蛋白、EiCsm6蛋白、Csm6活化剂、LwaCas13a-crRNA、RNase抑制剂、反应缓冲液、LF-Reporter的体积比为3～5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：10～14：1～2混合而成。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒使用时，将检测试剂盒中的各组分在0℃温度下混合，添加待检测液并充分混合后，在35.8-38.5℃℃水浴锅中孵育30-40分钟，再添加无RNA酶的DEPC水溶液，采用一次性核酸检测试纸条检测阴性或阳性。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒用于检测的新型冠状病毒RNA的浓度不小于10fM，其Orf1ab RNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：当检测试剂盒为20微升体系时，试剂盒中包括250nM LwaCas13a蛋白4微升、200nM EiCsm6蛋白1微升、20uM Csm6活化剂0.5微升、2.5uM LwaCas13a-crRNA 0.5微升、RNase抑制剂1微升、反应缓冲液(40mM Tris-HCl、60mM NaCl、6mM MgCl₂、pH7.3)11微升、20uM LF-Reporter1微升，剩余为待检测液。

5.一种快速检测新型冠状病毒的CRISPR方法，其特征在于：

(1)配制待检测液的稀释液

将待检测液与无RNA酶的DEPC混合进行稀释，配制一定体积及溶度的稀释液备用；

(2)配制检测试剂

先配制40mM Tris-HCl、60mM NaCl、6mM MgCl₂的反应缓冲液，其中pH为7.3，再按照体积比3～5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5：10～14：1～2依次将250nM LwaCas13a蛋白、200nM EiCsm6蛋白、20uM Csm6活化剂、2.5uM LwaCas13a-crRNA、RNase抑制剂、反应缓冲液、20uM LF-Reporter准备各组分，将步骤(1)中待检测液添加；

(3)孵育处理

混合液配制过程一直在0℃温度进行操作，充分混合后，将检测试剂盒内混合液在预热的35.8-38.5℃水浴锅中孵育30-40分钟；

(4)检测及结果

将步骤(3)中试剂放入反应管中，检测试纸条要求检测混合液不低于50微升，不足50微升添加适应的无RNA酶的DEPC水补足，混合，将其置于室温管架中，将一次性核酸检测试纸条放入每个反应管中，然后等待反应液流过试纸条，阳性对照样品应仅显示蓝色检测线，而阴性对照样品显示红色和蓝色两条检测线。

6.根据权利要求5所述的一种快速检测新型冠状病毒的CRISPR方法，其特征在于：其中，该方法用于检测浓度不小于10fM的新型冠状病毒RNA，其Orf1ab RNA基因序列如SEQ IDNO.1所示。

7.Csm6活化剂在包含权利要求1-4任一所述用于快速检测新型冠状病毒的检测试剂盒中的应用，其基因序列如SEQ ID NO.4所示。