[发明专利]联合检测COVID-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置及其使用法

权利要求书

1.一种联合检测新型冠状病毒COVID-19抗原和抗体的胶体金免疫层析装置，其特征在于，其包括COVID-19抗原检测试纸条和COVID-19抗体检测试纸条；所述COVID-19抗原检测试纸条包括依次相连的第一样品垫、第一结合垫、第一反应垫和第一吸水垫；所述第一结合垫上包被有胶体金标记的新型冠状病毒NP蛋白单克隆抗体和胶体金标记的兔IgG抗体，所述第一反应垫上沿样品流动方向依次设有第一检测线和第一质控线，所述第一检测线上包被有新型冠状病毒NP蛋白单克隆抗体；所述COVID-19抗体检测试纸条包括依次相连的第二样品垫、第二结合垫、第二反应垫和第二吸水垫；所述第二结合垫上包被有胶体金标记的新型冠状病毒NP蛋白和S蛋白；所述第二反应垫上设有第二检测线、第三检测线和第二质控线，所述第二检测线上包被有抗人IgM抗体，所述第三检测线上包被有抗人IgG抗体。

2.如权利要求1所述的胶体金免疫层析装置，其特征在于，所述胶体金标记中所采用的胶体金的粒径为55-65nm；胶体金的浓度为万分之五至万分之七，所述新型冠状病毒NP蛋白单克隆抗体和兔IgG抗体之间的浓度之比为（1-3）：1。

3.如权利要求1所述的胶体金免疫层析装置，其特征在于，所述第二反应垫上沿样品流动方向依次设有所述第二检测线、第三检测线和第二质控线。

4.如权利要求1所述的胶体金免疫层析装置，其特征在于，所述第一反应垫和第二反应垫为Millipore 180硝酸纤维素膜。

5.如权利要求1所述的胶体金免疫层析装置，其特征在于，所述第二结合垫上还包被有胶体金标记的鸡IgY；所述第一质控线上包被有羊抗兔IgG抗体；所述第二质控线上包被有羊抗鸡IgY。

6.如权利要求1所述的胶体金免疫层析装置，其特征在于，所述新型冠状病毒NP蛋白单克隆抗体为SARS冠状病毒NP蛋白单克隆抗体。

7.如权利要求1所述的胶体金免疫层析装置，其特征在于，所述新型冠状病毒NP蛋白和S蛋白采用基因重组法制备。

8.如权利要求7所述的胶体金免疫层析装置，其特征在于，所述新型冠状病毒NP蛋白的制备方法为：克隆新型冠状病毒COVID-19 NP蛋白基因序列，连入表达载体pET-30a，构建重组表达载体pET-30a-NP，经测序鉴定正确后转化至表达菌E.coli BL21(DE3)中，以IPTG诱导蛋白表达，收集样品进行超声破碎及Ni柱纯化；其中，所述表达载体pET-30a的N端带有6×His标签。

9.如权利要求7所述的胶体金免疫层析装置，其特征在于，所述新型冠状病毒S蛋白的制备方法为：克隆新型冠状病毒COVID-19 S蛋白中RBD区域的基因序列；将合成的基因序列插入带有IL-33信号肽和小鼠Fc片段的pcDNA3.1表达载体中，以此表达载体转染HEK293S细胞，再通过Protein G亲和纯化柱进行蛋白纯化。

10.如权利要求1-9任一项所述胶体金免疫层析装置的使用方法，包括如下步骤：

将适量血液样品溶液分别滴加到COVID-19抗原检测试纸条和COVID-19抗体检测试纸条的样品垫上；待一段时间后，根据检测线和质控线的显色情况，判断样品中是否含有新型冠状病毒COVID-19抗原和抗体，判断方法如下：对于COVID-19抗原检测试纸条，1）阳性：第一质控线、第一检测线均呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19抗原；2）阴性：第一质控线呈现红色条带，第一检测线不呈现红色条带，说明样品中不含新型冠状病毒COVID-19抗原；3）失效：第一质控线、第一检测线均不呈现红色条带或仅有第一检测线呈现红色条带，说明COVID-19抗原检测试纸条失效；对于COVID-19抗体检测试纸条，1）阳性：第二质控线、第二检测线均呈现红色条带，第三检测线不呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19 IgM抗体；第二质控线、第三检测线均呈现红色条带，第二检测线不呈现红色条带，说明样品中含有新型冠状病毒COVID-19 IgG抗体；2）阴性：第二质控线呈现红色条带，第二检测线和第三检测线均不呈现红色条带，说明样品中不含新型冠状病毒COVID-19抗体；3）失效：第二质控线、第二检测线、第三检测线均不呈现红色条带或仅有第二质控线不呈现红色条带，说明COVID-19抗体检测试纸条失效。