[发明专利]猪圆环病毒3型Cap蛋白、核酸、病毒样颗粒、疫苗及制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种猪圆环病毒3型Cap蛋白、核酸、病毒样颗粒、疫苗及制备方法和应用，涉及分子生物学技术领域，本发明提供的猪圆环病毒3型Cap蛋白，具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的蛋白质，其在酵母表达系统中能够进行可溶性表达，有效地提高了猪圆环病毒3型Cap蛋白的酵母表达效率。并且，本发明提供的猪圆环病毒3型Cap蛋白能够自组装为病毒样颗粒，应用该病毒样颗粒制备的疫苗兼有细胞免疫和体液免疫的特性，经免疫学相关实验表明，免疫效果很好。利用酵母表达系统表达猪圆环病毒3型Cap蛋白，具有生产成本低廉、生产工艺简单、通过高密度发酵能获得大量目标蛋白的优点，并且无内毒素污染，可用于大规模生产。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是涉及一种猪圆环病毒3型Cap蛋白、核酸、病毒样颗粒、疫苗及制备方法和应用。

背景技术

猪圆环病毒(PCV)是单股环状DNA病毒，基因长度约为1.7kb，是最小的动物DNA病毒之一，主要引起仔猪多系统衰竭综合征、肺炎、皮炎、肾病综合征、繁殖障碍，给生猪的养殖带来重大损失。PCV3是一种新型圆环病毒，国内尚无针对PCV3的商品疫苗。PCV3和PCV2cap蛋白基因的同源性很低，仅有30％的一致性，这也暗示已有的PCV2疫苗无法保护生猪免受PCV3的侵害。因此PCV3相应疫苗的研发至关重要。

最近的研究表明PCV cap蛋白可在多种系统中表达且获得亚单位或者嵌合表位疫苗，但是普通亚单位疫苗及嵌合表位疫苗的免疫效果不如病毒样颗粒疫苗，因此PCV3的VLP疫苗成重要的研发方向。目前已有研究表明，PCV3 cap蛋白在大肠杆菌、昆虫杆状病毒系统中成功表达且能组装成病毒样颗粒，并且能获得较好的免疫效果。但是大肠杆菌表达的PCVcap蛋白可溶性低，且有内毒素的污染，而后期去除内毒素工艺复杂且代价昂贵；昆虫杆状病毒系统表达的VLP具有很好的免疫效果，但是昆虫杆状病毒产生的VLP表达量低、生产成本昂贵、生产工艺复杂、作为动物疫苗难以大规模生产。酵母表达系统作为一个高效的蛋白表达系统，具有很多优点，但由于PCV3 cap蛋白其本身核定位序列的影响，直接表达该蛋白很容易形成不溶性蛋白聚集，因此在PCV3 cap蛋白在酵母系统进行可溶性表达具有挑战。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种猪圆环病毒3型Cap蛋白，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。

本发明的第二个目的在于提供上述猪圆环病毒3型Cap蛋白的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供编码权利要求1所述的猪圆环病毒3型Cap蛋白的核酸。

本发明的第四个目的在于提供由上述的猪圆环病毒3型Cap蛋白组装成的猪圆环病毒的病毒样颗粒。

本发明的第五个目的在于提供一种抗猪圆环病毒3型的病毒样颗粒疫苗。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供了一种猪圆环病毒3型Cap蛋白，所述猪圆环病毒3型Cap蛋白为由SEQID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；或，具有相同功能的由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列衍生的蛋白质。

本发明还提供了上述的猪圆环病毒3型Cap蛋白的制备方法，所述制备方法包括：将含有编码上述的猪圆环病毒3型Cap蛋白的核酸序列的重组质粒转入酵母菌株中，经所述酵母菌株表达后，得到所述猪圆环病毒3型Cap蛋白。

进一步地，将编码上述的猪圆环病毒3型Cap蛋白的核酸序列整合到真核表达载体中，得到重组质粒；

优选地，所述真核表达载体包括pPICZɑA。

进一步地，所述酵母菌株为X33、GS115、KM71或KM71H，优选X33。

进一步地，对所述表达产物进行纯化后，得到所述猪圆环病毒3型Cap蛋白。