[发明专利]靶向冠状病毒的通用DC细胞疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了靶向冠状病毒的通用DC细胞疫苗的制备方法，属于病毒疫苗制备技术领域，所述制备方法包括以下步骤：将包括HLA基因和冠状病毒抗原基因的融合基因连接到表达载体上，得到重组载体；再将重组载体转入待转染抗原递呈细胞，得到靶向冠状病毒的通用DC细胞疫苗。本发明的通用DC细胞疫苗针对冠状病毒具有靶向性能够有效的刺激CTL，并对靶细胞具有杀伤作用。

技术领域

本发明涉及病毒疫苗制备技术领域，尤其涉及靶向冠状病毒的通用DC细胞疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

冠状病毒在系统分类上属冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)，冠状病毒引起的人类疾病主要是呼吸系统感染。目前，对冠状病毒预防有特异性预防，即针对性预防措施(疫苗，疫苗的研制是有可能的，但需要时间较长，解决病毒繁殖问题是其难题)和非特异性预防措施(即预防春季呼吸道传染疾病的措施，如保暖、洗手、通风、勿过度疲劳及勿接触病人，少去人多的公共场所等)。其中现有技术中冠状病毒疫苗的种类有灭活冠状病毒疫苗、冠状病毒突起蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗等。但是目前现有技术没有报道或记载过关于靶向冠状病毒的通用DC细胞疫苗。

发明内容

本发明的目的在于提供靶向冠状病毒的通用DC细胞疫苗及其制备方法和应用，本发明的通用DC细胞疫苗针对冠状病毒具有靶向性，能够有效的刺激CTL，并对靶细胞具有杀伤作用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了靶向冠状病毒的通用DC细胞疫苗的制备方法，包括以下步骤：

1)将融合基因连接到表达载体上，得到重组载体；所述融合基因包括第一融合基因或第二融合基因；所述第一融合基因包括通过接头序列连接的HLA基因和冠状病毒开放阅读框蛋白基因；所述第二融合基因包括通过接头序列连接的HLA基因和冠状病毒结构蛋白基因；

2)将步骤1)所述重组载体转入待转染抗原递呈细胞，抗生素筛选成功转入重组载体的抗原递呈细胞，得到靶向冠状病毒的通用DC细胞疫苗；

步骤1)中所述冠状病毒开放阅读框蛋白基因选自ORF3a、ORF6、ORF7a和ORF8中的一种；所述ORF3a的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；ORF6的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述ORF7a的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述ORF8的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

步骤1)中所述冠状病毒结构蛋白基因选自冠状病毒E蛋白基因、冠状病毒S蛋白基因、冠状病毒PLP蛋白基因、冠状病毒M蛋白基因和冠状病毒N蛋白基因中的一种；所述冠状病毒E蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述冠状病毒S蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述冠状病毒PLP蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述冠状病毒M蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述冠状病毒N蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

优选的，步骤1)中所述HLA基因选自HLA-A0201、HLA-A0207、HLA-A3303、HLA-A3001、HLA-A0206、HLA-A0101、HLA-A2601、HLA-A0301、HLA-A0203、HLA-B4601、HLA-B4001、HLA-B1501、HLA-B5801、HLA-B1302、HLA-B5101、HLA-B1301、HLA-B0702、HLA-B4006、HLA-B3501、HLA-B5401、HLA-B5502、HLA-B4403、HLA-B1502、HLA-B4801、HLA-C0304、HLA-C0801、HLA-C0302、HLA-C0303、HLA-C0102、HLA-C0702、HLA-C1402、HLA-C0602、HLA-C1202、HLA-C1502和HLA-C1203中的一种。

优选的，步骤1)中所述接头序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。