[发明专利]一种比色法测定水产品中游离氨基酸总量的方法

说明书

本发明涉及食品检测技术领域，具体是一种水产品中游离氨基酸总量的测定方法，采用三氯乙酸作为提取剂，提取液中的游离氨基酸在弱酸性条件下与茚三酮发生显色反应，生成蓝紫色络合物，用紫外分光光度法进行定量测定。本发明优点在于：一是首次提供了一种比色法测定沙虫干中游离氨基酸总量的方法；二是采用三氯乙酸作为提取液，不但提高了提取效率，还有效的去除了水溶性蛋白的干扰；三是该方法具有操作简便、可重复性高、稳定性好，可直观的得出水产品中游离氨基酸的总量等优点。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体地说，是一种水产样品中游离氨基酸总量的测定方法。

背景技术

水产品蕴含着丰富的营养物质，如蛋白质、脂肪、氨基酸、维生素及矿物质等，且肉质鲜美，易于吸收，是人类不可缺少的重要食物之一。鱼虾蟹等各种水产品内含有人体需要的大量必需氨基酸，因此对氨基酸进行定量定性的分析研究具有十分重要的意义。

沙虫，学名“方格星虫”，Sipunculus nudus，富含蛋白质、矿物质元素,如钠、钾、水溶性和脂溶性维生素(VB₁、VB₂、VB₄)、牛磺酸以及人体必需氨基酸，具有抗疲劳、抗衰老、提高机体免疫力等功能，是一种高蛋白补品，被誉为“海洋虫草”，具有良好的营养价值和食疗功效。沙虫的食用方式主要有生鲜或加工成可以长期保存的干制品-沙虫干。沙虫干中的8种氨基酸及其他营养成分已在许多文献中进行了分析报道，但简便的直接测定其体内的游离氨基酸总量的方法还未见报道。

常见的测定氨基酸的方法有液相法、氨基酸分析仪法及紫外分光光度法等，紫外分光光度法一般用于测氨基酸总量，目前常用的液相法、氨基酸分析仪法可以分析单个组分，但分析总量不如紫外法方便。紫外分光光度法因灵敏度高、反应迅速、操作简单等优势而被广泛用于饮料、茶叶、牛肉等中游离氨基酸总量的测定，但将其用于测定水产品尤其是沙虫干中游离氨基酸总量的研究目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术所存在的上述问题，提供一种水产品中游离氨基酸总量的测定方法。

本发明的第一方面，提供一种水产品中游离氨基酸总量的测定方法，采用三氯乙酸作为提取剂，提取液中的游离氨基酸在弱酸性条件下与茚三酮发生显色反应，生成蓝紫色络合物，用紫外分光光度法进行定量测定，包括以下步骤：

A)将水产品样品在60-120℃下烘干1-5h；所述水产品为水产加工品；

B)准确称取上述样品1.00～5.00g(精确至±0.01g)(记录为质量m)于50mL离心管中，加入4-25mL的超纯水，静置0.5-5h；

C)将上述溶液中加入质量浓度为5-20％的三氯乙酸溶液，体积补齐为25mL(记录为体积V₁)，均质；

D)将上述混合液放置在4-25℃下，静置0.5-4h；

E)将上述溶液在5000-10000rpm下离心5-15min，保留上清液；

F)将上述上清液用1-6moml/L的氢氧化钠溶液调节pH至5.0-8.0；

G)将上述溶液准确移取0.20-1.00mL(记录为体积V₂)于25mL比色管中，用超纯水补至1.00mL；

H)将上述溶液中加入0.5-1mL pH 6.0-8.0的磷酸缓冲溶液和0.5-1mL质量分数为1-3％的茚三酮溶液，混合均匀；

I)将上述溶液在70-100℃水浴中反应5-30min，流水冷却至室温后，加水定容至刻度(记录为体积V₃)，摇匀；

J)将上述溶液在570nm波长下，用1cm石英比色皿测定吸光度值；