[发明专利]用于分析和鉴定桃遗传多样性的SCoT分子标记及其应用

说明书

本发明涉及用于分析和鉴定桃遗传多样性的SCoT分子标记及其应用，SCoT分子标记包括30个SCoT引物，应用步骤包括，采用CTAB提取法提取桃叶片DNA；利用SCoT引物进行桃PCR扩增；PCR产物琼脂糖凝胶电泳的电测；琼脂糖凝胶的结果分析。本发明可快速、高效、准确对桃品种进行鉴定，且简易便捷、成本低。

技术领域

本发明涉及用于分析和鉴定桃遗传多样性的SCoT分子标记及其应用，属于桃遗传多样性研究领域。

背景技术

随着我国桃产业的蓬勃发展，桃新品种的培育过程越来越短，市场桃品种更新换代愈加的频繁。新品种的出现易引起果农盲目的跟风，将果园老树砍掉，更换桃树新品种，其不知在桃品种更替的同时也带来一定的种植风险；如中华寿桃具有明显的裂果特点，裂果后的商品特性与经济价值极低，某些桃新品种存在中华寿桃的遗传背景，其也具有同样裂果特性，果农盲目种植极易带来种植风险和经济损失。此外，桃品种名称缺乏统一科学的命名，同一品种多个名字的现象时有发生，为科研与产业发展带了很多不便之处。不同桃品种之间的鉴别与亲缘关系的划分成为桃产业未来发展亟需解决的问题，发明高效、简洁、准确的鉴定方法是十分必要的。

发明内容

本发明针对上述问题，提供了用于分析和鉴定桃遗传多样性的SCoT分子标记及其应用。本发明利用30条引物可快速、高效、准确对桃品种进行鉴定，且本发明简易便捷、成本低。本发明的30个SCoT引物如表1所示：

表1

SCoT分子标记分析和鉴定桃遗传多样性的方法，步骤如下：

(1)采用CTAB提取法提取桃叶片DNA

①采取桃幼嫩叶片，加液氮研磨成粉末状，移入2ml离心管中；

②加入800μl的CTAB提取缓冲液，混匀(CTAB在65℃水浴预热)，每20min轻轻震荡几次，40min后12000r/min，离心10min；上下颠倒混匀100次，12000r/min，离心10min；

③小心吸取上清液，加入等体积的预冷异丙醇，混匀，4℃，20min，12000 r/min，离心10min；

④弃去上清液，用75％乙醇(体积分数)洗涤沉淀2次；

⑤室温下干燥后(一般干燥5-15min)，溶于30-50μl去离子水中，于-20℃或者-70℃下保存备用。

(2)基于SCOT引物的桃PCR扩增体系，反应总体积20μL；

桃DNA模板(50～75ng/μL)1.0μL；

2×Ex Taq Mix(含Mg²⁺、dNTPs、loading buffer)10.0μL；

SCoT引物(10μmol/L)1.0μL；

dd H₂O 8.0μL。

反应程序为：

94℃预变性5min；

94℃变性30s；

47℃退火30s；

72℃延伸3min，共35个循环；

72℃延伸5min；

4℃降温冷却。

(3)PCR产物琼脂糖凝胶电泳的电测