[发明专利]具有宽裂解谱的新副溶血弧菌噬菌体、其特异性引物及其应用

说明书

本发明公开了一种具有宽裂解谱的新副溶血弧菌噬菌体及其扩增应用，以及其特异性扩增引物，上述噬菌体对副溶血弧菌具有强烈的裂解作用，可由宿主菌特异性扩增，且增殖时间短，发酵产物效价高，为工业化生产噬菌体及其应用提供了噬菌体来源。上述噬菌体可用于可制备抗副溶血弧菌的药物，为控制由副溶血弧菌感染引起的急性肝胰腺坏死综合征提供新型药物。所述噬菌体单次泼洒养殖水体后，能够显著降低水体中副溶血弧菌的数量；将噬菌体拌料后饲喂南美白对虾，或者将对虾浸浴噬菌体，能够有效预防和治疗由副溶血弧菌引起的感染，提高对虾成活率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一株具有宽裂解谱的新副溶血弧菌噬菌体及其应用。

背景技术

对虾是全球性的水产养殖种类，也是全球范围内交易量最大的水产品。但据中国水产频道报道，GSMC报告显示：2016年中国对虾产量下降15万吨， 2017年仍然呈下降趋势。病毒和细菌性疾病是阻碍对虾可持续发展和农业市场波动的主要因素。急性肝胰腺坏死综合征(acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)是对虾养殖场一种新型的爆发性的病害，即早期死亡综合征 (early mortality syndrome,EMS)。该病最早于2009年在中国海南首次报道，主要危害凡纳滨对虾和斑节对虾。AHPND致死率高、发病急、传染性强，该病害已经对全球对虾养殖业造成巨大的冲击，使得对虾产量急剧下降并造成了严重的经济损失。

目前，对该疾病的防治方法多停留在改良养殖环境、改善虾苗的抗病性、使用化学性药物和抗生素等。但是大量抗生素及化学药物的使用，严重污染了水体，降低了水产品的品质。近年来，人们对生物防治更加关注，包括使用蛭弧菌和噬菌体防治的方法。

噬菌体是一类能特异性感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体的病毒，可以从污水、粪便以及土壤等自然环境中分离得到。噬菌体具有严格的宿主特异性，副溶血弧菌噬菌体只特异性感染副溶血弧菌，对人、动植物和其他微生物没有感染作用，且只能依附于相应的宿主菌存在，所以噬菌体具有安全性的特征，对环境没有副作用。噬菌体裂解细菌具有高效的特点，一个噬菌体颗粒感染宿主菌后，便呈指数级增长，能够持续感染其他宿主菌。噬菌体可通过多种方式进行给药，便于养殖人员操作，且作用效果持久。所以噬菌体能够作为一种具有杀菌作用的高效生物消毒剂和药物。

目前，仅有关于副溶血弧菌噬菌体应用于控制食品表面的副溶血弧菌，或给加工器具消毒的相关报道，但是副溶血弧菌噬菌体作为养殖环境水体消毒的使用方式，以及作为饲料添加剂饲喂对虾的噬菌体给药途径还未见报道。此外，公开的副溶血弧菌噬菌体都具有相同的缺点，即裂解谱都较窄。本身申请中的副溶血弧菌噬菌体针对123株副溶血弧菌，裂解率高达68.3％，具有宽裂解谱的特点。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一株具有宽裂解谱的新副溶血弧菌噬菌体及应用，对新副溶血弧菌具有广谱的杀菌能力，可被用于防治副溶血弧菌感染导致的疾病，也可作为水体消毒剂应用于海产养殖，旨在解决水产养殖场因副溶血弧菌感染而导致发病急、改水慢等困难。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种具有宽裂解谱的新副溶血弧菌噬菌体，其拉丁名为Vibrioparahaemolyticus，被命名为PG07，保藏编号为CGMCC NO.16392，于 2018年9月26日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

本发明还提供所述新副溶血弧菌噬菌体在制备预防或治疗副溶血性弧菌引起的疾病的药物中的用途。

可选地，上述噬菌体通过拌料口服给药，0.5h即可在对虾肝胰腺中检测到噬菌体，能够在肝胰腺中存在3d以上。给南美白对虾注射致病性副溶血弧菌后，饲喂浸润了噬菌体的饲料，可有效控制对虾的死亡率，与对照相比，显著提高对虾存活率。

优选地，所述疾病为对虾急性肝胰腺坏死病。本发明的副溶血弧菌噬菌体PG07为控制由副溶血弧菌感染引起的急性肝胰腺坏死综合征提供环保新药。