[发明专利]一种抗PD-1单克隆抗体

说明书

本发明属于生物医药领域，本发明提供了以高亲和力与人PD‑1结合的抗体或功能性片段，还提供了编码本发明抗体或功能性片段的氨基酸序列，包括本发明抗体的轻重链及互补决定区氨基酸序列，包括用于表达本发明抗体或其功能性片段的表达载体和宿主细胞以及本发明抗体或其功能性片段的生产方法；本发明提供的抗体亲和力高，阻断PD‑1/PD‑L1信号通路，在人类肿瘤治疗方面发挥重要作用。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，更具体地，涉及一种抗PD-1单克隆抗体。

背景技术

程序性死亡受体-1(Programmed Death-1，PD-1)是一类重要的免疫负调控分子(也称为“免疫检查点分子”)，属于CD28家族成员，结构上，该分子由288个氨基酸组成的I型跨膜糖蛋白，由胞外区、跨膜区和胞内区三部分构成。其中，PD-1分子的胞外区是一个免疫球蛋白样可变区(IgV)结构域，胞内区含有一个免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptortyrosine based inhibitory motif,ITIM)和一个免疫受体酪氨酸转换基序(immunoreceptor tyrosine based switch motif,ITSM)，ITSM是PD-1分子向胞内传递抑制信号的关键基序。PD-1主要表达于CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK-T细胞、B细胞和活化的单核细胞表面，PD-1是在活化T细胞和B细胞表面表达的免疫抑制性受体(Okazaki etal.Current Opinion in Immunology.2002,14:779-782；Bennett et al.JImmunol.2003,170:711-718)，主要受T细胞受体(TCR)或B细胞受体(BCR)信号的诱导表达；在调节免疫系统中的激活和抑制信号中发挥重要作用(Okazaki,Taku etal.International Immunology.2007,19(7):813-824)。

PD-1具有两个配体PD-L1和PD-L2，PD-L1是由290个氨基酸组成的跨膜蛋白，胞外区具有两个免疫球蛋白的恒定区IgV以及IgC样结构域。其主要表达于成熟的巨噬细胞、B细胞、CD4-T细胞、树突细胞上，并在肿瘤细胞中高表达。PD-L2是由270个氨基酸组成的跨膜蛋白，但是PD-L2表达区域却极其有限，仅在巨噬细胞和树突细胞中存在，被认为主要在免疫呈递中起作用；其与PD-L1均属于B7配体家族，有34％的同源性，此外两者有着类似该家族其他成员的共同结构基础。PD-1能够与其配体(PD-L1和PD-L2)相互作用，通过细胞内信号转导通路显著抑制CD3和CD28介导的T细胞活化以及细胞因子产生，因此是调节T细胞反应的重要免疫哨卡。在正常情况下，PD-1/PD-Ls信号通路可以诱导和维持外周组织的免疫耐受，对防止组织的过度炎症反应以及自身免疫性疾病的发生具有积极作用；在肿瘤和病毒感染时，细胞PD-L1和PD-L2表达上调，与T细胞表面的PD-1受体相互作用，能够抑制T细胞的活化、增殖以及抑制对肿瘤的杀伤，使T细胞功能发生紊乱；在肿瘤的发生中，肿瘤细胞表达的PD-L1与PD-1结合后，对淋巴细胞产生抑制作用，会抑制生长因子的生成和细胞增殖，下调T细胞免疫刺激性细胞因子如IFN-γ、IL-2和TNF-α的分泌以及存活蛋白的表达，促进免疫抑制性细胞因子IL-10分泌，而促进肿瘤细胞的免疫逃逸。PD-1/PD-L1信号通路与肿瘤发展有着密切关系，在肿瘤患者体内，PD-L1高表达能增强肿瘤的转移能力，导致患者死亡率上升，并且与患者预后不良相关。研究发现在肺癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、膀胱癌、结肠癌、乳腺癌、神经胶质瘤、肾癌、胃癌、食道癌、口腔鳞状细胞癌及头颈癌等人类肿瘤组织中都检测到高表达的PD-L1蛋白。用阻断型抗PD-1单抗阻断PD-1/PD-L1信号可以通过上调IFN-γ、IL-2、IL-10分泌，并有效逆转CD4+和CD8+T细胞的增殖抑制，同时使T细胞的活化程度和杀伤能力显著增强。