[发明专利]一种用于痕量核酸提取纯化的磁性微球制作方法

说明书

本发明公开了一种用于痕量核酸提取纯化的磁性微球制作方法，具体涉及纳米科学技术及生物医药领域，包括以下制作步骤：S1、Fe3O4磁性微球的制备及筛选：采用超声辅助水相共沉淀方法合成Fe3O4，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性微球表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚；S2、Fe3O4磁性微球的表面包被修饰：在Fe3O4磁性微球表面用SiO2包被修饰。本发明通过采用超声辅助水相共沉淀方法制备Fe3O4磁性微球，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性微球表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚，然后在Fe3O4磁性微球表面用SiO2包被修饰，制备出具有较强磁响应性的Fe3O4／SiO2亚微米微球，该磁性微球具有优良的生物相容性、亲水性以及非常好的化学稳定性和胶体稳定性。

技术领域

本发明实施例涉及纳米科学技术及生物医药领域，具体涉及一种用于痕量核酸提取纯化的磁性微球制作方法。

背景技术

磁性微球用于核酸提取是其在生物医学领域重要运用领域之一，任何与核酸有关的科学或医学研究都离不开核酸的提取，而且核酸提取的效率和效果直接影响后续的研究或医疗诊断。尤其是磁性微球用于DNA的检测，是体外诊断和治疗疾病的基础，具有高选择性，高灵敏度，快速，方便的特点。磁性微球对于简化检测程序，提高检测结果的准确度，降低检测下限，以及实现检测工作的自动化操作等方面都具有广泛的应用前景。

随着分子生物学技术发展的日新月异，在很多的领域需要对及其痕量核酸进行检测，比如法医检测、转基因检测、液体活检中的游离核酸检测、病毒检测等，尤其是临床样本往往病毒含量较低，病毒核酸提取效率的高低将直接影响到实验的阳性检出率，因此对磁性微球提出了更高的要求，对此，现有技术中磁性微球的制作工艺还无法满足。

发明内容

为此，本发明实施例提供一种用于痕量核酸提取纯化的磁性微球制作方法，通过采用超声辅助水相共沉淀方法制备Fe3O4磁性微球，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性微球表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚，然后在Fe3O4磁性微球表面用SiO2包被修饰，制备出具有较强磁响应性的Fe3O4／SiO2亚微米微球，该磁性微球具有优良的生物相容性、亲水性以及非常好的化学稳定性和胶体稳定性，主要适用于痕量核酸的分离纯化，以解决现有技术中存在的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：一种用于痕量核酸提取纯化的磁性微球制作方法，包括以下制作步骤：

S1、Fe3O4磁性微球的制备及筛选：铁盐在碱性环境中，采用超声辅助水相共沉淀方法合成Fe3O4，以柠檬酸根修饰Fe3O4磁性微球表面，使颗粒呈分散状态，减少团聚；与普通机械搅拌相比，超声不仅加快了纳米粒的生成，而且显著提高了纳米粒的单分散性；

S2、Fe3O4磁性微球的表面包被修饰：在Fe3O4磁性微球表面用SiO2包被修饰。

进一步地，步骤S1中，Fe3O4磁性微球的制备及筛选步骤具体包括：

S1.1、分别配置0.1-1mol 的Fe3+水溶液与Fe2+水溶液，按照Fe3+与Fe2+物质的量的比为2：1混合置于三口瓶中；

S1.2、上述混合液搅拌均匀后，通入氮气除氧30 min，向混合液中加入碱溶液调整pH值为10-12，同时开启超声并剧烈搅拌0.5小时，加入0.1-2mol柠檬酸钠溶液至体系，继续超声搅拌0.5小时，停止超声用水浴锅加热至90℃反应2小时，期间继续机械搅拌并通入氮气；

S1.3、反应结束，冷却至室温后，反应产物磁分离，用去离子水反复洗涤至中性，然后超声分散，得到具有良好亲水分散性的Fe3O4磁性微球。

进一步地，步骤S1.2中，通过梯度设置转速和溶液中柠檬酸根的浓度，合成多组Fe3O4磁性微球。

进一步地，进行Fe3O4磁性微球合成时，搅拌速度分别设置为500r/min、700r/min、900r/min共三个梯度的转速。