[发明专利]用于制备经蛋白水解处理的多肽的方法

权利要求书

1.一种具有蛋白水解活性的多肽，其包含与SEQ ID NO:1的序列具有至少50％序列相同性的多肽序列。

2.一种核酸分子，其包含编码权利要求1的多肽的核酸序列和任选的调节元件。

3.一种载体，其包含如权利要求2所述的核酸分子。

4.一种细胞，其包含如权利要求2所述的核酸分子或如权利要求3所述的载体。

5.一种制备具有蛋白水解活性的多肽的方法，所述方法包括如下步骤：

(a.)化学合成或从核苷酸序列翻译多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO:1的序列具有至少50％序列相同性的多肽序列；和

(b.)纯化步骤(a.)中的多肽。

6.由权利要求5所述的方法能获得的多肽。

7.一种抗体，其特异性结合至如权利要求1或6所述的多肽。

8.如权利要求7所述的抗体在纯化权利要求1或6所述的多肽的方法中的应用。

9.用于制备经蛋白水解处理的多肽的方法，所述方法包括将如下物质(a)与(b)接触的步骤：

(a)第一多肽，所述第一多肽选自权利要求1或6所述的多肽、Lys-N、Lys-C、精氨酰内肽酶、胞浆素或Omptin蛋白，

(b)第二多肽，所述第二多肽易被所述第一多肽蛋白水解；

其中所述接触导致该第二多肽被蛋白水解处理成为至少两种切割产物。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述第二多肽包含与选自SEQ IDNO:3～25中任一条的多肽序列具有至少50％序列相同性的氨基酸序列；

优选地，其中优选所述第一多肽在所述SEQ ID NO:3～25中任一条序列中的碱性氨基酸残基(例如，His、Lys、Arg)的直接C端位置上蛋白水解切割所述第二多肽。

11.如权利要求9或权利要求10所述的方法，其特征在于，所述第二多肽是梭菌神经毒素(例如BoNT/A)。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述梭菌神经毒素选自：缺乏功能结合结构域(H_CC)并因而无法结合至天然梭菌神经毒素受体(例如，包含梭菌神经毒素的LH_N片段的多肽或由该片段组成的多肽)的梭菌神经毒素多肽、具有结合至天然梭菌神经毒素受体的经修饰的梭菌神经毒素结合结构域(H_CC)的梭菌神经毒素多肽，或具有使所述梭菌神经毒素与非天然梭菌神经毒素受体结合的非梭菌结合结构域的梭菌神经毒素多肽(所述多肽任选地缺乏功能性结合结构域(H_CC)，以使梭菌神经毒素与天然梭菌神经毒素受体的结合最小化)。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述梭菌神经毒素的L-链和H-链组分来自相同或不同梭菌神经毒素血清型和/或亚型。

14.如权利要求9-13中任一项所述的方法，其特征在于，所述第二多肽是通过在大肠杆菌中的重组表达制备的单链梭菌神经毒素。

15.如权利要求9-14中任一项所述的方法，其特征在于，所述第二多肽是单链梭菌神经毒素，并且其中所述第一和第二多肽的接触产生梭菌神经毒素双链多肽，所述梭菌神经毒素双链多肽包含通过二硫键共价连接至梭菌神经毒素H-链组分的梭菌神经毒素L-链组分。

16.如权利要求9-15中任一项所述的方法，其特征在于，所述经蛋白水解处理的第二多肽是梭菌神经毒素双链多肽，其中所述L-链的C端和所述H-链的N端与由野生型梭菌中相同单链梭菌神经毒素多肽生成的相应双链梭菌神经毒素的相应末端相同。