[发明专利]一种快速检测2019-nCoV核酸试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种新的快速检测2019‑nCoV核酸试剂盒及应用，选择2019‑nCoV三个位点进行检测，检测准确性大大提高。其中包括一个2019‑nCoV特异性位点，大大提高了检测的精确性，特异性高；本试剂盒采用实时荧光PCR技术和水解探针技术在同一反应管中实现一种或多种病原体在核酸水平上的定性检测，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线和熔解曲线，根据两者实现即时结果的判断，能较好对该病毒进行定性分析，检测结果可用于病程进展分析及临床辅助诊断，具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种新的快速检测2019-nCoV核酸试剂盒及应用。

背景技术

新型的冠状病毒感染患者临床表现为发热、乏力等全身症状，伴有干咳，呼吸困难等，该病毒引发的肺炎可迅速发展为重症肺炎、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征、脓毒性休克、多器官功能衰竭、严重酸碱代谢紊乱等，甚至危及生命。2020年1月12日被世界卫生组织命名为2019新型冠状病毒（2019-nCoV）。

目前，实验室检测方法目前主要有病毒分离、核酸检测等。在本发明之前，有关病毒检测试剂主要对病毒进行定性的分析，检测时间较长；难以诊断处于潜在复制的病毒，且难以开展病程进展分析。

发明内容

本发明针对上述现有技术存在的不足，提供了一种新的快速检测2019-nCoV核酸试剂盒及应用。本试剂盒采用实时荧光PCR技术和水解探针技术在同一反应管中实现一种或多种病原体在核酸水平上的定性检测，操作简单，全程不开盖减少污染，检测后无活性病毒残余，具有一定的生物安全性。仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，和熔解曲线，根据两者实现即时结果的判断，能较好对该病毒进行定性分析，且应用三对特异性引物检测提高精确度，节省检测的时间，检测结果可用于病程进展分析及临床辅助诊断，具有重要的应用价值。

具体技术方案如下：

本发明的目的之一是提供一种新的快速检测2019-nCoV核酸试剂盒。

包括三对引物：引物1、引物2与引物3；

其中，引物1为针对2019-nCoV特异性位点的引物；

所述的引物1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示，具体为ATGGCAGACGGGCGATTT；

所述的引物1的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示，具体为TTTTGGGGTAAGTAACCACAAGTAGT；

所述的引物2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示，具体为AAAATCTGTGTGGCTGTCACTCGG；

所述的引物2的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示，具体为AACGACAGTAATTAGTTATTAATTATACTGCGT；

所述的引物3的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示，具体为TACTATTAAGTGTTTGCCTAGGTTCTTTA；

所述的引物3的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 6所示，具体为AAAACACCTAAAGCAGCGGTTGAGT。

以上方向均为5’-3’。

引物1的目的基因如SEQ ID NO. 7所示，其相应的DNA基因片段为2019-nCoV的特异性逆转录片段；

引物2的目的基因如SEQ ID NO. 8所示，在已知基因中，其相应的通过逆转录获得的DNA基因片段仅存在于2019-nCoV与下述基因组：

蝙蝠冠状病毒分离株RaTG13（Select seq MN996532.1 Bat coronavirus isolateRaTG13, complete genome）；