[发明专利]一种提高筑波链霉菌产孢量的方法

说明书

本发明属于发酵工程领域，具体涉及一种提高筑波链霉菌产孢量的方法。本发明通过N,N‑二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺或N,N‑二乙基甲酰胺的加入，能够显著诱导筑波链霉菌稳定产生孢子，孢子产量提高36倍以上，解决了筑波链霉菌在常见培养基上不产孢、产孢量少或产孢不稳定的难点，为筑波链霉菌的工业化扩培提供了稳定可靠的方法，保证了他克莫司生产的批间稳定性。该方法操作简便易行，适合工业大生产，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于发酵工程领域，具体涉及一种提高筑波链霉菌产孢量的方法。

背景技术

他克莫司((Tacrolimus，又名FK506)FK506，是从链霉菌属(streptomyces)中分离出的发酵产物，其化学结构属23元大环内酯类抗生素。具有免疫抑制作用强，肝肾移植受体的急、慢性排斥反应小，对细菌和病毒的抵抗力强等优点。

目前他克莫司的获得主要通过细菌微生物(或放线菌发酵)发酵获得。筑波链霉菌是他克莫司的生产菌种，作为优良的工业菌种，除了具有优良的代谢能力以外，还必须易于扩大培养、具有良好的保藏稳定性。由于孢子比菌丝体具有更强的抗逆性和存活能力，从而更适于长期保存和扩大培养，因此培养出大量孢子是发酵生产稳定的前提。如果筛选获得了具有优良性状的菌株，但因产孢量低而满足不了工业化生产使用需求，该菌株也是难以被产业化应用的。因此，孢子的形成情况对菌种保藏稳定性、批次间稳定性及产品质量起着非常重要的作用。然而，在实验中发现，筑波链霉菌产孢数量并不理想，尤其在长期多代培育之后，产孢量少甚至不产孢。

中国专利CN201510664099.X提供一种基因工程菌株筑波链霉菌L21，通过基因工程提高他克莫司生物合成途径中的特异性调控基因的拷贝数，作为基因改造他克莫司生物合成途径中的限速酶以提高他克莫司的产量，以降低工业化生产过程的成本。

中国专利CN200510013322.0通过对制备他克莫司的原始模式菌进行激光诱变来提高他克莫司的产量。

以上两篇专利，通过基因改造或物理诱变的方法获得了新的高产菌株，但是未提及新菌株的产孢能力及提高孢子产量的方法。

中国专利CN201810085143.5通过向FK506发酵过程中外源添加化学触发剂提升FK506产量。该专利也未提及菌株的产孢能力及提高孢子产量的方法。中国专利CN201410058407.X提供一种链霉菌孢子的生产方法，该方法仅适用于跟链霉菌有关的农用微生物，经验证筑波链霉菌在该固体培养基上不产孢。

菌种选育主要指通过诱变、融合等技术手段、结合大量的筛选工作，来获得高产菌株，而获得的高产菌株往往由于产孢量的不足导致高产菌株不稳定以至难以被产业化应用。现有技术往往仅关注菌种选育，均未提及增加筑波链霉菌产孢量的方式、方法。为了易于保藏、扩大培养，改良产孢方法增加产孢量是筑波链霉菌工业化生产他克莫司的一个难题。

发明内容

鉴于现有技术存在的诸多缺陷，本发明提供了一种提高筑波链霉菌在固体培养基产孢量的方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种提高筑波链霉菌产孢量的固体培养基，所述固体培养基包含调节剂。

优选地，所述调节剂选自N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、N,N-二乙基甲酰胺中的一种或多种。

优选地，所述调节剂的添加量为0.1％-3％。

更优选地，所述调节剂的添加量为0.5％-2％。

进一步优选地，所述调节剂的添加量为1.0％。

一种提高筑波链霉菌在固体培养基产孢量的方法，其步骤为：

a、取产孢少或不产孢的筑波链霉菌(Streptomyces tuskubaensis)菌种接种于斜面培养基，进行活化。