[发明专利]人抗体IgG的CH2片段突变体及应用

说明书

本发明公开了一种人抗体IgG的CH2片段突变体及应用，包括CS‑20‑1、CS‑20‑2。新的CH2骨架在单克隆抗体、Fc融合蛋白或者直接以该骨架开发抗体的研发和临床使用上具有重要意义，包括提高其稳定性后有利于降低生产、纯化成本，有利于降低单抗聚集引发的免疫原性等。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地指一种人抗体IgG的CH2片段突变体及应用。

背景技术

抗体以其特异性强、灵敏度高，广泛应用于各个领域，尤其是生命科学研究和临床治疗如ELISA、Western blot、免疫荧光分析、疾病快速诊断以及作为生物制剂治疗各种疾病。因此，进入21世纪以来，人们也开始越来越关注治疗性抗体药物的研发与临床应用，这是因为它对人体毒副作用小、具有天然和高度特异性的疗效，并且创造出了巨大的社会效益和经济效益。同时，基于CH2片段开发的小型化抗体以其分子量相对较小而具有很好的组织渗透性，可以识别全长抗体难以识别的表位。

然而，以野生型CH2片段为骨架开发的抗体存在自身局限性，如稳定性差、抗聚集能力弱，在其表达、纯化、贮存等过程中，会倾向于聚集或者降解。而蛋白聚集所导致的免疫原性，不仅降低了药效，同时也给临床应用带来很大的风险。因此，提高抗体热稳定性与抗聚集能力是该领域亟待解决的问题之一。

发明内容

本发明的目的在于填补现有技术的空白，提供一种人抗体IgG的CH2片段突变体及应用。本发明以CH2为骨架，对其进行修饰改造，最终得到稳定性与抗聚集性得到提高的新克隆，命名为CS-20-1，CS-20-2。

为实现上述目的，本发明提供了一种人抗体IgG的CH2片段突变体，其氨基酸序列如SEQ No.2所示，其核酸序列如SEQ No.1所示，命名为CS-20-1。

本发明还提供了一种人抗体IgG的CH2片段突变体，其氨基酸序列如SEQ No.4所示，其核酸序列如SEQ No.3所示，命名为CS-20-2。

CS-20-1、CS-20-2可用于开发Fc融合蛋白和单克隆抗体。

本发明提供的CS-20-1，CS-20-2骨架，是通过以下方法得到：首先，构建CH2的易聚集区氨基酸随机突变噬菌体展示文库。随后利用特异性抗CH2抗体对该噬菌体展示文库进行筛选，获得候选克隆。最后，经过鉴定得到CS-20-1，CS-20-2。

CS-20-1、CS-20-2相对于CH2在N末端(EU编号，231-237)七个氨基酸(APELLGG)被删除，同时CS-20-1进行了六个点突变(F241L，L242C，V264K，N276K，V395K和K334C)，CS-20-2进行了七个点突变(F241L，L242C，F243L，V264K，N276K，V395K和K334C)。氨基酸截短突变和引入L242C，K334C是基于之前的研究而引入的突变，其余突变是经过本专利中建库筛选的方法获得的，这些点突变可以减少蛋白易聚集区而提升蛋白的抗聚集能力。

本发明的有益效果：

新的CH2骨架在单克隆抗体、Fc融合蛋白或者直接以该骨架开发抗体的研发和临床使用上具有重要意义，包括提高其稳定性后有利于降低生产、纯化成本，有利于降低单抗聚集引发的免疫原性等。

附图说明

图1为m01s，CS-20-1和CS-20-2蛋白易聚集区域预测图。

图2为CS-20-1，CS-20-2蛋白与CH2蛋白的存在形式分析(单体、二聚体等)。

图3为圆二色谱分析CS-20-1、CS-20-2分子构象的分析图。

图4为CS-20-1、CS-20-2与CH2蛋白的抗聚集性比较图。

图5为CS-20-1、CS-20-2和CH2蛋白与识别CH2结构域的anti-CH2单抗的亲和力比较图。