[发明专利]水稻成熟种子糊粉层分离方法

说明书

本发明涉及一种水稻成熟种子糊粉层分离方法，具体包括以下步骤：步骤1、将糙米去胚后放入小型精米机中研磨；步骤2、研磨15s后收集粉末状物质，即为糊粉层。步骤1中，需将糙米装满仪器进料斗。本发明的方法通过研磨15s即可快速分离水稻糊粉层，研磨得到的糊粉层很容易收集且可以定量，方法简单容易操作，分离产物不含有胚的干扰。

技术领域

本发明涉及水稻种子组织分离领域，具体涉及一种水稻成熟种子糊粉层分离方法。

背景技术

现有的糊粉层分离方法主要包括以下几种方式：

1、人工分离糊粉层

由于糊粉层与种皮紧密结合，很难从麸皮中分离出来。目前已经发展了许多不同的分离方法，从满足实验室生化分析的小规模技术，到适合大规模糊粉层生产的半工业化工艺。在实验室研究，人工分离全谷物是获得纯净样品的较好的方法。分离干谷物籽粒时需要浸水后，种子大部分组织都可以分离(Barron et al.2007)。还有其它浸提麸皮的方法，如浸提剂和有机溶剂浸提等(Brouns et al.2012)。而这种方法受到了时间和劳动力限制不能量化，且费时费工，不适用于工业化生产。

2、机械分离方法

由于糊粉层的营养特性非常重要，为了大规模分离糊粉层，开发了新的湿分离和干分离工艺。Kvist et al.(2010)发明了一种湿法分离工艺，它结合了几种酶处理和湿法磨粉步骤，顺序离心后超滤。与湿法分离法不同，干分离法只需要物理/机械过程，防止糊粉层细胞结构的生化变化。在干分离过程中，首先将各种麸皮组织进行研磨分离，根据颗粒的大小、质量、密度、静电等特性对其进行分类，提高糊粉层的纯度(Hemery et al.2009)。

首先清除小麦籽粒表面的杂物，浸水5分钟后的小麦放入小麦精米机去掉表皮，然后清除籽粒表面的杂物后再次浸水，最后将小麦籽粒放入小麦精米机中，采用原装磨辊就可以成功分离小麦糊粉层(田丰贺2012)。

该方法可以用于食品工业分离大量糊粉层，但是对于实验室所需少量糊粉层，用于糊粉层功能等方面的研究，则不太适用。

2.1.2.2分离少量糊粉层

Galland等(2014)选取100粒籽粒饱满、没有病虫害侵蚀的种子，经过砻谷机去除谷壳后获得糙米，将其放入JMNJ-3小型精米机中研磨15分钟后半薄切片显示，研磨15分钟后种子无糊粉层结构。

该方法的缺点是耗时较长，而且获得的糊粉层量极少且未定量。

3.激光显微分离技术

在水稻籽粒发育前期，糊粉层细胞和淀粉胚乳在结构上连接紧密，籽粒发育初期比较柔软，手工和机械分离糊粉层与胚乳细胞是非常困难的。Ishimaru等(2007)将早期发育的颖果用丙酮或者乙醇醋酸溶液作为固定剂，采用羧甲基纤维素或石蜡作为包埋剂。利用激光显微切片技术可以精确分离发育初期的胚乳细胞和糊粉层细胞，可以获得高质量完整性的RNA。

该方法的缺点是对仪器设备以及操作人员的技术要求均较高，并且成熟种子糊粉层分离较难且每次获得量很少，操作技术和环境要求严格。

现有分离技术的缺点

1人工分离方法受到了时间和劳动力限制不能量化，且费时费工，不适用于工业化生产。

2现有小麦籽粒糊粉层分离技术研究比较多，分离技术相对成熟，但是分离小麦糊粉层需要浸水过程容易导致糊粉层细胞生理生化反应发生改变，吸水后的细胞放入超低温保存细胞容易胀破。

3工业所用方法可以用于大样本量的样品，例如食品工业分离大量糊粉层，但是对于实验室所需少量糊粉层，用于糊粉层功能等方面的研究，则不太适用。