[发明专利]一种人间充质干细胞体外快速扩增用添加剂及扩增方法有效
| 申请号： | 202010163642.9 | 申请日： | 2020-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN111154718B | 公开（公告）日： | 2021-01-08 |
| 发明（设计）人： | 王小奇;张晓盈;黄睿龙;苏琳琳;孙向东 | 申请（专利权）人： | 河南侨创生命科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 郑州芝麻知识产权代理事务所(普通合伙) 41173 | 代理人： | 郭尊言 |
| 地址： | 450000 河南省郑州市高新技*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 人间 干细胞 体外 快速 扩增 添加剂 方法 | ||
1.一种人间充质干细胞体外快速扩增用添加剂，用于添加于干细胞体外扩增用培养基中，该添加剂由以下有效成分组成：没食子酸、生长因子FGF-2、烟酰胺、丙戊酸、鞘氨醇-1-磷酸、吡格列酮、4-[2-(苄基氨基)-2-氧代乙酰基]-N-(2,3-二甲基苯基)苯甲酰胺、P57抑制剂；
所述添加剂在培养基中的质量浓度用量为：没食子酸1～2ng/L、生长因子FGF-210～20ng/L、烟酰胺2～3ng/l、丙戊酸1.5～3ng/L、鞘氨醇-1-磷酸1～2ng/L、吡格列酮3～4ng/L、4-[2-(苄基氨基)-2-氧代乙酰基]-N-(2,3-二甲基苯基)苯甲酰胺12～15ng/L、P57抑制剂8～10ng/L。
2.如权利要求1所述的人间充质干细胞体外快速扩增用添加剂，其特征在于，所述添加剂在培养基中的质量浓度用量为：没食子酸1.5ng/L、生长因子FGF-2 15ng/L、烟酰胺2.5ng/L、丙戊酸2ng/L、鞘氨醇-1-磷酸1.5ng/L、吡格列酮3.5ng/L、4-[2-(苄基氨基)-2-氧代乙酰基]-N-(2,3-二甲基苯基)苯甲酰胺13ng/L、P57抑制剂9ng/L。
3.一种人间充质干细胞体外快速扩增方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
1)将体外分离的人间充质干细胞，在胶原包被的板上预培养约24小时，所述人间充质干细胞来源为脂肪组织；
2)取扩增用培养基，所述扩增用培养基为添加了10％的胎牛血清和2mM L-谷氨酰胺的L-DMEM基础培养基，在扩增用培养基中加入权利要求1～2任一项所述的添加剂，形成改性的扩增用培养基，在改性的扩增用培养基中接种步骤1)中完成预培养的人间充质干细胞，每隔3天更换新的改性的扩增用培养基，在37℃的温度、5％的二氧化碳分压、饱和湿度的环境下持续培养7天，即完成。
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