[发明专利]IgE嵌合性双特异性抗体制备及应用

说明书

一种用于治疗I型过敏反应的人源化嵌合抗IgE双特异抗体，涉及治疗性双特异抗体领域，涉及用于抗I型过敏反应的人源化嵌合抗IgE抗体及其与多种不同反应特异性的抗体(Fab’)2片段偶联物。本发明专利的目的在于，找到一种通用的治疗变态反应的药物或方法，采用双特异抗体的方法，用多种不同反应特异性的抗体(Fab’)2片段，偶联人源化基因重组抗IgE抗体，起到双功能治疗I型过敏反应的效果，缩短治疗时间，降低毒副作用，优化I型过敏反应的治疗方案。

技术领域：本发明涉及治疗性双特异抗体领域，涉及用多种不同反应特异性的抗体(Fab’)2片段，偶联人源化基因重组抗IgE抗体。

背景技术：

2005年，在世界首个过敏性疾病日，世界变态反应组织公布对30个国家进行流行病学调查结果显示：在这些国家的12亿总人口中，22％(2亿5千万人)患有免疫球蛋白E(IgE)介导的过敏性疾病，如过敏性鼻炎、哮喘、结膜炎、湿疹、食物过敏、药物过敏和严重过敏反应等。

美国一项依据皮肤试验的调查显示：大约4000～5000万人有过敏问题，其中3950万人患有季节性过敏性鼻炎。据世界卫生组织(WHO)估计，全球约有1亿5千万人患有哮喘，其中50％以上的成人及至少80％的儿童患者均由过敏因素诱发，每年有180000多人死于哮喘。

免疫球蛋白E(IgE)介导的过敏性疾病，主要是I型变态反应(I型超敏反应)即速发型变态反应，又称过敏反应。

I型超敏反应的特点有以下几点：(1)发生快，几秒钟至几十分钟内出现症状，消退亦快；为可逆性反应；(2)由结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的IgE抗体所介导；(3)主要病变在小动脉，毛细血管扩张，通透性增加，平滑肌收缩。

I型超敏反应的病理机制：反应原进入机体后，选择性的诱导特异性B细胞产生IgE，IgE以其Fc段与肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面的Fc受体结合，使机体处于致敏状态，当抗原再次进入机体时，便与已经结合在致敏靶细胞上的IgE特异性结合，引发细胞脱颗粒反应，释放的生物活性物质可引起平滑肌收缩、毛细血管扩张、腺体分泌增加等一系列病理改变。主要疾病有：全身性过敏反应、皮肤超敏反应、消化道超敏反应、呼吸道超敏反应。

自抗IgE抗体报道以来，已有多个IgE抗体药物的专利，拟找到一种通用的治疗变态反应的药物或方法。

发明内容：

本发明专利的目的在于，找到一种通用的治疗变态反应的药物或方法。采用双功能抗体的方法，用多种化学物质、多种不同的方法，修饰人源化基因重组抗IgE抗体，起到抗IgE抗体与化学药物，双功能治疗I型过敏反应的效果，缩短治疗时间，降低毒副作用，优化I型过敏反应的治疗方案。为解决上述问题，本发明采取的技术方案如下：

人IgE免疫小鼠，取免疫后小鼠的脾脏与SP2/0细胞融合，通过极限稀释法，筛选抗人IgE抗体；PCR方法获取抗人IgE抗体的轻链和重链可变区基因，采用基因重组的方法，分别与人抗体IgG的轻链和重链的恒定区基因连接，转化CHO细胞，极限稀释法克隆表达人源化抗人IgE抗体。

采用双特异抗体的方法，用多种不同反应特异性的抗体(Fab’)2片段，偶联人源化基因重组抗IgE抗体，起到双功能治疗I型过敏反应的效果，缩短治疗时间，降低毒副作用，优化I型过敏反应的治疗方案。

实施方式：

专利实施案例1：鼠抗人IgE抗体的获取

人IgE免疫小鼠，取免疫后小鼠的脾脏与SP2/0细胞融合，通过极限稀释法，筛选抗人IgE抗体。