[发明专利]靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体及其应用

权利要求书

1.一种靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体，其特征在于，载体包括禽4型腺病毒的基因组序列、pBR322的复制起点核酸序列和卡那霉素抗性核酸序列；所述基因组序列中的fiber基因经过人工改造，所述fiber基因包括fiber1和fiber2，人工改造的方式包括：

在fiber1基因Knob区的IJ环中插入RGD4C短肽核酸序列；所述RGD4C短肽氨基酸序列为CDCRGDCFC。

2.根据权利要求1所述的一种靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体，其特征在于，

在fiber1基因的IJ环中插入RGD4C短肽的编码序列，且将fiber2基因Knob区替换为人35型腺病毒fiber knob区的核酸序列。

3.根据权利要求1所述的一种靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体，其特征在于，在fiber1基因Knob区的IJ环中插入RGD4C短肽核酸序列的方式包括：

改造后fiber1基因编码的蛋白的402Aa-403Aa部位插入了RGD4C短肽氨基酸序列。

4.根据权利要求2所述的一种靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体，其特征在于，改造后fiber1基因编码的蛋白的402Aa-403Aa部位插入了RGD4C短肽氨基酸序列，同时，fiber2基因编码蛋白的283Aa-479Aa替换为如Seq.NO 6所示的人35型腺病毒Knob区氨基酸序列。

5.一种如权利要求1-4任意一项所述靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体的制备方法，其特征在于，包括：

(1)以禽4型腺病毒的完整基因组为骨架，构建含有pBR322的复制起点核酸序列、卡那霉素抗性核酸序列的载体I；

(2)利用载体II获得人工改造的fiber核酸片段；所述载体II为由pMD-18T和FAdV-4病毒2个fiber基因构建的穿梭质粒pMD-FAV4Fs；

(3)利用载体II中的人工改造的fiber核酸片段替换载体I的基因组中的fiber核酸片段，获得fiber改造的靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体。

6.如权利要求1-4任意一项所述的靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体在制备基因治疗试剂盒或疫苗中的应用。

7.一种基因治疗试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-4任意一项所述的靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体。

8.根据权利要求7所述的基因治疗试剂盒，其特征在于，所述禽4型腺病毒载体中携带与治疗哺乳动物疾病相关的外源基因。

9.一种重组疫苗，其特征在于，所述重组疫苗采用如权利要求1-4任意一项所述的靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体，载体中携带与预防哺乳动物疾病相关的外源基因。