[发明专利]间充质干细胞球及其制备方法和应用以及成球培养基在制备间充质干细胞球中的应用

权利要求书

1.一种制备间充质干细胞球的方法，其特征在于，该方法包括将间充质干细胞接种至成球培养基中进行培养，得到间充质干细胞球；

其中，所述成球培养基包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；所述添加物为抗坏血酸-2-磷酸镁、亚硒酸钠、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素、碳酸氢钠、转铁蛋白和转化生长因子；

其中，所述转化生长因子为转化生长因子TGFβ1或转化生长因子Nodal；

其中，所述成球培养基中不含血清；

其中，1L所述成球培养基中，抗坏血酸-2-磷酸镁的含量为64 mg，亚硒酸钠的含量为14μg，碱性成纤维细胞生长因子的含量为100μg，胰岛素的含量为19.4 mg，碳酸氢钠的含量为0.543 g，转铁蛋白的含量为10.7mg，转化生长因子的含量为TGFβ1的含量为2 μg，余量为DMEM/F12培养基；或

1L所述成球培养基中，抗坏血酸-2-磷酸镁的含量为64 mg，亚硒酸钠的含量为14 μg，碱性成纤维细胞生长因子的含量为100μg，胰岛素的含量为19.4 mg，碳酸氢钠的含量为0.543 g，转铁蛋白的含量为10.7mg，转化生长因子的含量为Nodal的含量为100 μg，余量为DMEM/F12培养基。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述培养在细胞培养器中进行，所述细胞培养器为TC表面处理的细胞培养皿或TC表面处理的细胞培养板。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，间充质干细胞的接种密度为4×10⁴-5×10⁴个细胞/cm²培养面积。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述培养的条件使得间充质干细胞从贴壁状态自动聚集成球。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述培养的条件包括：培养时间为3-5天。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述间充质干细胞的制备方法包括：

（1）将在间充质干细胞培养基中贴壁生长的间充质干细胞消化后离心；

（2）用磷酸缓冲液清洗后，再次离心，得到用于培养细胞球的所述间充质干细胞。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其中，所述间充质干细胞为人间充质干细胞或动物间充质干细胞。

8.根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其中，所述间充质干细胞选自脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和羊膜间充质干细胞中的一种。

9.一种成球培养基在制备间充质干细胞球中的应用，其特征在于，所述成球培养基包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；所述添加物为抗坏血酸-2-磷酸镁、亚硒酸钠、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素、碳酸氢钠、转铁蛋白和转化生长因子；

其中，所述转化生长因子为转化生长因子TGFβ1或转化生长因子Nodal；

其中，所述成球培养基中不含血清；

其中，1L所述成球培养基中，抗坏血酸-2-磷酸镁的含量为64 mg，亚硒酸钠的含量为14μg，碱性成纤维细胞生长因子的含量为100μg，胰岛素的含量为19.4 mg，碳酸氢钠的含量为0.543 g，转铁蛋白的含量为10.7mg，转化生长因子的含量为TGFβ1的含量为2 μg，余量为DMEM/F12培养基；或

1L所述成球培养基中，抗坏血酸-2-磷酸镁的含量为64 mg，亚硒酸钠的含量为14 μg，碱性成纤维细胞生长因子的含量为100μg，胰岛素的含量为19.4 mg，碳酸氢钠的含量为0.543 g，转铁蛋白的含量为10.7mg，转化生长因子的含量为Nodal的含量为100 μg，余量为DMEM/F12培养基。