[发明专利]一种酶法制备卵磷脂型PUFA的方法

说明书

本发明公开了一种酶法制备卵磷脂型PUFA的方法，属于酶的分离与应用技术领域。采用对磷脂类底物具有sn‑2位偏好性的固定化偏甘油酯脂肪酶偶联对磷脂类底物具有sn‑1位偏好性的固定化甘油三酯脂肪酶协同催化制备卵磷脂型PUFA，大大提高了卵磷脂型PUFA的生成速率和产物中卵磷脂型PUFA的含量，具有良好的经济效益和工业应用前景。

技术领域

本发明属于油脂加工技术领域，具体涉及一种酶法制备卵磷脂型PUFA的方法。

背景技术

研究表明，PUFA(Polyunsaturated fatty acids)对人体的健康至关重要。如石榴酸(9c,11t,13c-C18:3)具有抗肥胖、抗糖尿病和抗多种癌症等功效；EPA(C20:5n3)和DHA(C22:6n3)可促进大脑、神经和视网膜的发育，且具有预防心血管疾病、抗炎、抗癌等功效。近期，越来越多的研究表明卵磷脂型PUFA相比于甘油三酯型、乙酯型和游离脂肪酸型PUFA具有更高的生物利用度和更强的生理功效。如研究表明Mfsd2a可以转运卵磷脂型EPA/DHA的体内代谢产物——溶血磷脂型EPA/DHA，但不能转运游离的EPA/DHA，从而使溶血磷脂型EPA/DHA更容易通过血脑屏障进入大脑发挥功效。但目前天然来源的卵磷脂型PUFA十分有限，主要来源于鱼籽、虾类和贝类。因此，研究卵磷脂型PUFA的合成具有重要意义。

目前，通常采用反应条件温和、催化特异性高和环保的生物酶法代替传统的化学法来合成卵磷脂型PUFA。常用的酶法合成卵磷脂型PUFA的方法主要有：酶法酸解、酶法酯化和酶法转酯化。酶法酸解和酶法转酯化制备卵磷脂型PUFA时，卵磷脂易水解，导致最终产品中卵磷脂含量通常低于20％，但相比于酶法酸解，酶法转酯化制备卵磷脂型PUFA的过程中由于酰基供体较稳定，因而酶法转酯化制备得到的卵磷脂型PUFA的理化性质较好；酶法酯化制备卵磷脂型PUFA时，由于酶对磷脂类底物的位置特异性的影响，导致产物主要为sn-1溶血磷脂型PUFA，卵磷脂型PUFA的含量通常低于5％。总之，目前采用酶法制备卵磷脂型PUFA时，由于反应过程中卵磷脂易水解和所用酶位置特异性的影响，导致产物中卵磷脂含量普遍偏低。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种酶法制备卵磷脂型PUFA的方法，采用对磷脂类底物具有sn-2位偏好性的固定化偏甘油酯脂肪酶偶联对磷脂类底物具有sn-1位偏好性的固定化甘油三酯脂肪酶协同催化甘油磷酰胆碱与富含PUFA的脂肪酸酯化制备卵磷脂型PUFA，大大提高了卵磷脂型PUFA的生成效率和产物中卵磷脂型PUFA的含量。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种酶法制备卵磷脂型PUFA的方法，包括以下步骤：

步骤1：将甘油磷酰胆碱与脂肪酸混合均匀；

步骤2：将步骤1得到的混合底物依次与固定化偏甘油酯脂肪酶和固定化甘油三酯脂肪酶在真空条件下进行反应，循环直至反应达到平衡；

步骤3：收集反应产物，得到卵磷脂型PUFA。

优选地，步骤1中，甘油磷酰胆碱与脂肪酸的摩尔比为1:10～40。

优选地，步骤2中，固定化偏甘油酯脂肪酶为固定化Lipase G“Amano”50或固定化Lipase SMG1。

进一步优选地，固定化偏甘油酯脂肪酶的制备方法为：采用丙烯酸十八烷酯ECR8806树脂作固定化载体，按照脂肪酶与固定化载体比例为40mg/g树脂，在30℃下以200rpm的转速搅拌8h。

优选地，步骤2中，固定化甘油三酯脂肪酶为固定化Lipozyme TL 100L或固定化MAS1。

优选地，固定化甘油三酯脂肪酶的制备方法为：采用非极性大孔ECR1030树脂作固定化载体，按照甘油三酯脂肪酶与固定化载体比例为40mg/g树脂，在30℃下以200rpm的转速搅拌8h。