[发明专利]新型冠状病毒重组蛋白S1抗原及双抗原夹心ELISA抗体检测试剂盒

权利要求书

1.一种新型冠状病毒双抗原夹心ELISA抗体检测试剂盒，所述试剂盒包括：包被由SEQID No.1所示的核苷酸序列编码的新型冠状病毒重组蛋白S1的支持介质、酶标试剂以及用于新型冠状病毒抗原抗体的检测试剂、阴性对照、阳性对照，其中，所述酶标试剂为含酶标记的SEQ ID No.1所示的核苷酸序列编码的新型冠状病毒重组蛋白S1的溶液，

所述包被所述新型冠状病毒重组蛋白S1的含量为0.4～1.0μg/ml，所述支持介质为微量滴定板，

所述酶标试剂为酶标记新型冠状病毒重组蛋白S1的1∶6000～1∶15000的稀释液；

所述酶标试剂用酶标稀释液稀释，所述酶标稀释液为含20%V/V新生牛血清、0.05%V/VProClin300、0.05%V/V Tween-20的磷酸盐缓冲液；

所述酶标记的酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或β-D-半乳糖甘酶。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述用于新型冠状病毒抗原抗体的检测试剂为显色液A、显色液B，所述显色液A为每1L水中含磷酸氢二钠14.7g、柠檬酸9.3g、过氧化脲0.3g，所述显色液B为每1L水中含四甲基联苯二胺0.2g、无水乙醇100ml；

所述阳性对照为新型冠状病毒重组蛋白S1免疫兔的血清，所述阴性对照为含20%V/V新生牛血清、0.05%V/V ProClin-300的磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括终止液、洗涤液，所述终止液为2M H₂SO₄溶液，所述洗涤液为磷酸盐缓冲液。

4.一种根据权利要求1所述试剂盒的制备方法，其中，所述制备方法包括：

步骤1）用基因工程手段制备SEQ ID No.1编码的新型冠状病毒重组蛋白S1，按包被浓度0.4～1.0μg/ml、100μl/孔包被于微量滴定板，2～8℃包被16～24小时或37℃包被2小时后洗涤、封闭、干燥；

步骤2）酶标记所述新型冠状病毒重组蛋白S1，并用酶标稀释液将酶标记所述新型冠状病毒重组蛋白S1按1∶6000～1∶15000稀释作为酶标试剂；

步骤3）分别制备洗涤液、显色液、终止液、阳性对照、阴性对照；

步骤4）将所述步骤1）包被的微量滴定板、所述步骤2）的酶标试剂及所述步骤3）制备的洗涤液、显色液、终止液、阳性对照、阴性对照组装成试剂盒。

5.根据权利要求4所述制备方法，其中，所述步骤1）中的所述包被浓度为0.5μg/ml；

所述步骤1）中的所述封闭用封闭液封闭，所述封闭液为含5%M/V蔗糖、20%V/V新生牛血清、0.05%V/V ProClin300的磷酸盐缓冲液，所述封闭的条件为2～8℃封闭16～24小时或37℃封闭2小时；

所述步骤1）中的所述干燥的条件为在18℃～26℃、相对湿度不高于30%的条件下干燥3～6小时。

6.根据权利要求4所述制备方法，其中，所述步骤2）中所述稀释倍数为1∶8000；

所述步骤2）中所述酶标稀释液为20%V/V新生牛血清、0.05%V/V ProClin300、0.05%Tween-20的磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求4所述制备方法，其中，所述步骤3）中所述显色液包括显色液A、显色液B，所述显色液A为每1L水中含磷酸氢二钠14.7g、柠檬酸9.3g、过氧化脲0.3g，所述显色液B为每1L水中含四甲基联苯二胺0.2g、无水乙醇100ml；

所述阳性对照为新型冠状病毒重组蛋白S1免疫兔的血清，所述阴性对照为含20%V/V新生牛血清、0.05%V/V ProClin-300的磷酸盐缓冲液；

所述终止液为2M H₂SO₄溶液；

所述洗涤液为磷酸盐缓冲液。