[发明专利]流感病毒血凝素亚型分型引物、试剂盒和分型方法

说明书

本发明提供一种流感病毒血凝素亚型分型引物、试剂盒和分型方法。流感病毒血凝素亚型分型引物包括特定核苷酸序列的特异性引物对中的至少一对，分别针对H1～H9亚型进行设计。这些引物对基于公开数据库的极大样本量设计，通过多序列比对的保守序列分析，所设计出的引物对长期有效应对流感病毒血凝素基因漂变和基因突变等状况的发生，在一个较大的时间尺度上维持分型结果的有效性。

技术领域

本发明涉及流感病毒分型技术领域，尤其是涉及一种流感病毒血凝素亚型分型引物、试剂盒和分型方法。

背景技术

流感病毒(influenza virus)为正粘病毒科(Orthomyxoviridae)流感病毒属，根据流感病毒的核壳蛋白和基质蛋白抗原性的不同有甲(A)、乙(B)和丙(C)三个血清型，其中，只有甲、乙两型流感病毒对人类具有流行病学意义。流感病毒的基因组由8条单股负链的RNA组成，主要的抗原决定簇是血凝素(haemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)两种跨膜糖蛋白。

每个HA分子由HA1和HA2两个亚单位经二硫键连接组成。HA裂解为HA1和HA2是病毒感染细胞的先决条件，也是决定病毒致病力高低的重要因素之一。目前发现16种不同的HA血清亚型，不同亚型间氨基酸差异显著，且一般不会出现血清学交叉反应。HA是流感病毒中突变率最高的蛋白，除了组成受体结合位点的氨基酸外，整个HA分子都是高度变异的，只要几个氨基酸的突变就会导致病毒逃避宿主的免疫系统。流感病毒的抗原性和致病性很大程度上取决于HA的变异情况，使得HA成为病毒变异、毒力和宿主特异性的主要决定因素，与流感的流行暴发和疫苗防控有着密切关系。

流感病毒的变异除了RNA病毒固有的突变、同源重组、非同源重组、基因组重配等，还包括抗原漂变等形式，所以一般HA亚型的分型技术有效周期短，需要进行周期性的更新以保证结果的准确性。因此，有必要提出一组能够长期有效对流感病毒血凝素亚型进行分型的引物。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种流感病毒血凝素亚型分型引物、试剂盒和分型方法。

第一方面，本发明的一个实施例提供了一种流感病毒血凝素亚型分型引物，包括核苷酸序列如下的特异性引物对中的至少一对：

针对流感病毒血凝素H1亚型的特异性引物对：

H1-F：5′-AATGTRACWGTRACMCACTCW-3′，

H1-R：5′-TCRAARACCTACACRAGRTTA-3′；

针对流感病毒血凝素H2亚型的特异性引物对：

H2-F：5′-TAYCAYCACAGCAATGAYCAR-3′，

H2-R：5′-ATRGTTTADGAACCGDTADATRCGATGT-3′；

针对流感病毒血凝素H3亚型的特异性引物对：

H3-F：5′-ATYACTCCAAATGGAAGCATY-3′，

H3-R：5′-CGACTYCTRTACCCKTTA-3′；

针对流感病毒血凝素H4亚型的特异性引物对：

H4-F：5′-TGYTAYCCATTTGATGTG-3′，

H4-R：5′-GTYCCTATGTTYCTGTAR-3′；

针对流感病毒血凝素H5亚型的特异性引物对：

H5-F：5′-GTBACKGTYACACAYGCY-3′，

H5-R：5′-GAGTACCTTTTACTYTCTTGAGATCTR-3′；