[发明专利]一种乙醛脱氢酶重组基因及其乳酸菌载体和应用

权利要求书

1.一种人源重组乙醛脱氢酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.权利要求1所述的人源重组乙醛脱氢酶的人工合成方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)将NCBI数据库获取的ALDH2基因序列进行密码子优化得到ALDH2-CO(Codonoptimized)酶基因；

2)在ALDH2-CO酶基因的5’端和3’端分别引入限制性内切酶KpnI和EcoNI酶切位点，并依次通过PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳和胶回收过程获得ALDH2目的基因片段；

3)将ALDH2目的基因片段以电转化的方式连接至乳酸菌表达载体；

4)将步骤3)获得的乳酸菌表达载体进行细菌培养；

5)提取乳酸菌细胞的质粒并进行双酶切，将构建的重组乳酸菌菌种复苏三代培养至约为加终浓度5ng/ml Nisin的诱导，每隔一段时间取10ml培养液离心收集菌体，PBS重悬采用超声破碎法裂解菌体，得到乙醛脱氢酶粗酶液。

3.根据权利要求2所述的人源重组乙醛脱氢酶的人工合成方法，其特征在于：所述步骤1)中进行密码子优化的具体方法为：采用Signal P 3.0Ser ver在线分析网站对ALDH2基因序列进行分析，并根据乳酸菌的密码子偏好，将ALDH2基因序列中在目的乳酸菌中使用频率低的密码子替换为使用频率高的密码子。

4.根据权利要求2所述的人源重组乙醛脱氢酶的人工合成方法，其特征在于：所述步骤2)中PCR扩增的具体操作为：扩增体系：2×TaqMaster/Mix 12.5μL，引物各1ul，DNA模板2ul，共计25μL；扩增程序：2×(94℃3min，70℃5min)，94℃30s，55℃30s，70℃5min，共10个循环。

5.根据权利要求2所述的人源重组乙醛脱氢酶的人工合成方法，其特征在于：所述步骤2)中琼脂糖凝胶电泳的条件为：将扩增产物用2％琼脂糖凝胶电泳，电压100v，时间30min。

6.根据权利要求2所述的人源重组乙醛脱氢酶的人工合成方法，其特征在于：所述步骤4)中细胞培养的控制条件为：37℃培养13-14小时。

7.一种编码权利要求1所述的人源乙醛脱氢酶的重组基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

8.一种乳酸菌工程菌，其特征在于：是表达权利要求7所述的重组基因的乳酸菌。

9.权利要求1所述的人源重组乙醛脱氢酶、权利要求2～6任意一项所述的人源重组乙醛脱氢酶的人工合成方法、权利要求7所述的重组基因或者权利要求8所述的乳酸菌工程菌在制备含乙醛脱氢酶产品中的应用。