[发明专利]一种低分子量透明质酸片段诱发血红细胞钱串状聚集的应用

说明书

本发明公开了低分子量透明质酸片段诱发末梢血或静脉血红细胞钱串状聚集的应用，其诱发红细胞钱串状聚集的最小浓度与透明质酸片段的分子量大小呈负相关关系，可用于测定低分子量透明质酸片段的分子量大小或测定其产品批间生产的分子量变异范围。本发明公开了低分子量透明质酸片段促进血红细胞沉降率，可用于测定产品批间生产的分子量变异程度。本发明公开了平均分子量35kDa的低分子量透明质酸片段诱发人红细胞钱串状聚集是通过结合人红细胞表面CD44，可利用其进行低分子量透明质酸片段的活性检测。本发明还公开了平均分子量35kDa的透明质酸片段对人中性粒细胞活化有抑制作用，可作为预防和治疗中性粒细胞活化和释放各种氧化物质相关炎症性疾病的药物应用。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及一种低分子量透明质酸片段诱发末梢血或静脉血红细胞钱串状聚集的应用。

背景技术

人用高分子透明质酸皮下组织注射液主要用于美容，有多种产品，包括Restylane，其分子量大于1.0x10⁶daltons。人美容用透明质酸皮下组织注射液可用于隆鼻、丰唇和除皱纹等多种美容用途(1、2、3)。由于Restylane分子量大，粘度也大，其分子量都使用粘度计测定。还由于，Restylane分子量和粘度大，皮下注射局部不良反应也较多，包括局部注射炎症反应红、肿、硬、痛。较严重的不良反应是注射局部小血管凝血堵塞和由其引发的溃疡(4)。

理论上，较低分子量的透明质酸皮下注射产品局部不良反应也较小，即局部小血管堵塞的可能性较小。因此，较低分子量的透明质酸静脉血管注射也成为可能，如马专用Legend Multi Dose for intravenous use in horse only(Bayer Corporation)，其分子量3.0x10⁵daltons(www.equinelegend.com)(5)。低分子量的透明质酸注射产品分子量用粘度计测定不准，目前主要使用凝胶电泳和多角度激光方法测定(6、7)。

文献研究(8、9、10、11)表明人初乳纯化出的透明质酸片段HA35的分子量平均35kDa。文献研究还表明人乳肪组织有透明质酸酶PH20(12)。本发明人使用重组人透明质酸酶PH20制造了平均分子量35±8kDa的透明质酸片段B-HA(13、14)。本发明人发现重组人透明质酸酶PH20充分酶解制造的透明质酸片段B-HA商业化产品(Medical device type1，LUQIN Food Drug Medical Device registration number:20190021)有明确的人皮肤和粘膜抗炎活性，包括对人皮肤粘膜临床炎症表现红肿硬痛有显著治疗作用(如图1所示)，并在本地报道了这个临床抗炎作用和申报了专利(14、15、16、17、18、19、20、21)。

以上文献研究提示HA35或平均分子量35±8kDa的透明质酸片段B-HA的商业化产品，需要敏感的低分子量透明质酸皮下组织注射产品分子量测定方法，以控制商业化产品分子量在可以接受的范围内。另外，针对低分子量透明质酸片段，尤其是平均分子量35±8kDa的透明质酸片段的生物活性的作用机制和新的生物活性以及潜在新临床应用的研究还有限(22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36)，还需进一步研究和开发。

参考文献

1.Narins RS,Brandt F,Leyden J,Lorenc P,Rubin M,Smith S.A randomized,double-blind multicenter comparison of the efficacy and tolerability ofRestylane vs Zyplast for the correction of the nasolabial folds.Dermatol Surg2003；29(6):588-595.