[发明专利]一种使用单个肿瘤细胞构建小鼠肿瘤模型的方法

说明书

本发明涉及一种使用单个肿瘤细胞构建小鼠肿瘤模型的方法。具体地，根据本发明的方法包括将包含单个肿瘤细胞的纤维蛋白胶移植到小鼠的步骤；优选地，所述方法包括将包含单个肿瘤细胞的纤维蛋白胶移植到小鼠皮下的步骤。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体地，本发明涉及一种使用单个肿瘤细胞建立小鼠肿瘤模型的方法以及该模型在研究肿瘤发生、发展机制，筛选抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

恶性肿瘤作为一种严重威胁人类生命健康的疾病，至今没有有效的治疗手段，最主要的原因是肿瘤的发生发展机制依然尚未研究清楚。当今科学界普遍认为，在肿瘤的发生过程中，单个的肿瘤起始细胞，在合适的体内微环境下，逐渐分裂增殖，最终形成病理可见的肿瘤组织。因此，肿瘤的发生发展，复发转移，与肿瘤组织中个别具有自我更新，再生能力的肿瘤生成细胞，也称为肿瘤干细胞，息息相关。并且，这部分肿瘤生成细胞往往在转移复发的过程中发挥着至关重要的作用。因此，单个细胞成瘤模型的建立是此肿瘤发生发展过程模拟和研究的重要有效手段。然而，目前的科研手段依然无法从单个肿瘤细胞起建立生物肿瘤模型。在肿瘤的基础科研中，合适的动物模型是研究肿瘤发生，发展机制和肿瘤治疗的重中之重。因此，单细胞建立小鼠皮下异位瘤模型的建立对研究单个肿瘤起始细胞的细胞学特性和发展过程，以及对理解肿瘤的发生，发展有着重要的意义。

在现有阶段的实验研究手段中，研究人员都是通过多个肿瘤(10)的移植或化学诱导的方法建立起稳定的动物肿瘤模型。这两种肿瘤模型的建立方法无法有效地模拟单个肿瘤起始细胞在最初肿瘤发生，发展的过程，对科研人员研究肿瘤的发生发展造成了阻碍。建立起一种单个肿瘤细胞起始发生的动物肿瘤模型，是当代肿瘤研究的迫切需求。

发明内容

在第一方面，本发明提供了一种构建小鼠肿瘤模型的方法，所述方法包括将包含单个肿瘤细胞的纤维蛋白胶移植到小鼠的步骤；优选地，所述方法包括将包含单个肿瘤细胞的纤维蛋白胶移植到小鼠皮下的步骤。

具体地，本发明提供了一种构建小鼠肿瘤模型的方法，所述方法包括以下步骤：

1)将包含肿瘤细胞的培养基与纤维蛋白原混合，铺于96孔板中；优选地，所述纤维蛋白原的浓度为0.1至10μg/ml，更优选浓度为4-8μg/ml；更优选地，所述纤维蛋白原为人纤维蛋白原或三文鱼纤维蛋白原；

2)向步骤1)中的96孔板中加入凝血酶，在37℃下孵育60分钟；

3)向孔中加入培养基，37℃下培养6至12小时；

4)选择包含单个肿瘤细胞的纤维蛋白胶，去除培养基，和

5)将步骤5)中获得的包含单个肿瘤细胞的纤维蛋白胶移植到小鼠，优选地，移植到小鼠皮下组织。

在根据本发明方法的一个优选实施方案中，所述单个肿瘤细胞选自黑色素瘤、肝癌、乳腺癌、结直肠癌、骨髓瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、头和颈癌、神经胶质瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、弥漫性大B-细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、急性成淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞样白血病、原发性纵隔大B-细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、富含T-细胞/组织细胞的大B-细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、髓样细胞白血病-1蛋白、骨髓异常增生综合征、胃癌、卵巢癌、成淋巴细胞性白血病、淋巴细胞白血病、子宫内膜癌、前列腺癌、甲状腺癌、软骨肉瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌、多形性成胶质细胞瘤、骨癌、尤因氏肉瘤、子宫颈癌、脑癌、膀胱癌、透明细胞肾细胞癌、咽喉癌、肝胆癌、中枢神经系统癌、食管癌、恶性胸膜间皮瘤、全身性轻链淀粉样变性、淋巴浆细胞性淋巴瘤、骨髓异常增生综合征、骨髓增生性肿瘤、神经内分泌肿瘤、梅克尔细胞癌、睾丸癌和皮肤癌的肿瘤细胞。

在第二方面，本发明提供了一种制备包含单个肿瘤细胞的纤维蛋白胶的方法，所述方法包括以下步骤：