[发明专利]一种用于血细胞分离计数的抗体芯片及其制备方法

权利要求书

1.一种用于血细胞分离计数的抗体芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将载玻片浸泡于氢氧化钠溶液中，使之羟基化；

S2.将步骤S1得到的载玻片浸泡在3-氨丙基三乙氧基硅烷乙醇水溶液中，使之氨基化；

S3.将步骤S2得到的载玻片浸泡戊二醛水溶液中，使之醛基化；

S4.将步骤S3得到的载玻片区域包被链霉亲和素；

S5.在步骤S4得到的载玻片不同区域画框，分别孵育不同的抗体；

S6.对步骤S5得到的载玻片的包被区域进行封闭；

S7.对步骤S6得到的载玻片进行干燥；

S8.将步骤S7得到的载玻片真空包装。

2.根据权利要求1所述一种用于血细胞分离计数的抗体芯片的制备方法，其特征在于，步骤S1的具体方法为：配制1-10wt％的氢氧化钠溶液；将载玻片放置于氢氧化钠溶液中浸泡后；转移至超声清洗机中超声，用纯化水清洗，然后烘干。

3.根据权利要求1所述一种用于血细胞分离计数的抗体芯片的制备方法，其特征在于，步骤S2的具体方法为：配制1-10wt％硅烷偶联剂KH550的乙醇水溶液；将载玻片浸泡在硅烷偶联剂KH550乙醇水溶液中，取出，用纯化水洗涤，再用95％(v/v)乙醇洗涤，然后烘干。

4.根据权利要求1所述一种用于血细胞分离计数的抗体芯片的制备方法，其特征在于，步骤S3的具体方法为：配制1-10wt％戊二醛水溶液；将所有载玻片浸泡在戊二醛水溶液中，取出载玻片，置于纯化水中超声波清洗机处理，然后用纯化水清洗，将醛基载玻片烘干。

5.根据权利要求1所述一种用于血细胞分离计数的抗体芯片的制备方法，其特征在于，步骤S4的具体方法为：

(1)将湿盒置于水平工作台，加纯化水至湿盒底部被完全覆盖，将载玻片正面朝上，置于湿盒支架上；

(2)用稀释液将链霉亲和素稀释，混合均匀，配置1-100μg/ml链霉亲和素工作液；

(3)在载玻片上每个包被区域加入链霉亲和素工作液；

(4)将湿盒置于冰箱内孵育；

(5)将载玻片插入载玻片架上，在PBST溶液中旋转提拉，洗涤后将载玻片置于鼓风干燥箱中吹干至载玻片表面无液体。

6.根据权利要求1所述一种用于血细胞分离计数的抗体芯片的制备方法，其特征在于，步骤S5的具体方法为：

(1)将吹干的载玻片正面朝上，置于湿盒支架上；

(2)用稀释液分别将0.1-100μg/ml的抗体稀释，混合均匀，得到抗体工作液；

(3)在包被了亲和素的载玻片上对应的框分别加入稀释好的抗体工作液置于培养箱中孵育；

(4)将载玻片插入载玻片架上，在PBST溶液中旋转提拉，洗涤后将载玻片置于鼓风干燥箱中吹干至载玻片表面无液体。

7.根据权利要求6所述一种用于血细胞分离计数的抗体芯片的制备方法，其特征在于，所述抗体包括Biotin anti-human CD3-、Biotin anti-human CD19、Biotin anti-humanCD16+56、Biotin anti-human CD38、Biotin anti-human CD3、Biotin anti-human HLA-DR、Biotin anti-human CD14、Biotin anti-human CD4+、Biotin anti-human CD25+、Biotin anti-human Fox p3+、Biotin anti-human CD8+、Biotin anti-human CD28+、Biotin anti-human CD28-、Biotin anti-human CD29+、Biotin anti-human CD34+、Biotin anti-human CD45RA+、Biotin anti-human Th1、Biotin anti-human Th2中的一种或几种。