[发明专利]一种无DMSO的冷冻保存液在器官和组织冷冻保存中的应用

权利要求书

1.一种无DMSO的冷冻保存液在器官和/或组织冷冻保存中的应用，其特征在于，所述冷冻保存液以每100mL体积计，含有仿生控冰材料0.01-50g，多元醇5.0-45mL，水溶性糖0.1-1.0mol L^-1，血清0-30mL，余量为缓冲液，所述仿生控冰材料选自PVA和/或氨基酸类仿生控冰材料；优选地，所述器官为卵巢器官；所述组织为卵巢组织切片。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述氨基酸类仿生控冰材料选自聚合度≥2的聚氨基酸、氨基酸、肽类化合物中的一种或两种以上；

优选地，所述肽类化合物为多肽、糖肽衍生物、或式(I)所示化合物，

其中，R选自取代或未取代的烷基，所述取代基可以选自-OH、-NH₂、-COOH、-CONH₂等，例如，R为取代或未取代的C1-6烷基，优选R为-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CH₂COOH；n为大于等于1而小于等于1000的整数。

3.根据权利要求1或2所述的应用，所述控冰材料为PVA，所述PVA含量为0.1-6.0g；

优选，所述多元醇可以为C2-5的多元醇，例如乙二醇，丙二醇，丙三醇中的任一种；

优选，所述水溶性糖可以为非还原性双糖、水溶性多糖、糖酐中的至少一种，例如选自蔗糖、海藻糖、羟丙基甲基纤维素、聚蔗糖中至少一种；

优选，所述缓冲液可以为DPBS、hepes-buffered HTF缓冲液、或其他细胞培养缓冲液中的至少一种；

优选，所述血清针对人源性冷冻保存对象可选人血清白蛋白或其替代物，例如十二烷基磺酸钠，针对非人源性冷冻保存对象可选胎牛血清或牛血清白蛋白。

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述仿生控冰材料为聚氨基酸或氨基酸，所述控冰材料的含量为0.01-50g；

优选地，所述控冰材料为PVA与氨基酸和/或聚氨基酸的组合，例如由0.1-5.0g的PVA和8.0-35g的氨基酸和/或1.0-9.0g聚氨基酸组成。

5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述PVA选自等规PVA、间规PVA和无规PVA的一种或两种以上的组合，例如所述PVA的间同规整度为15％-60％，优选50％-60％；

优选，PVA选自分子量为10-500kDa或者更高分子量的PVA；

优选，所述PVA选自水解度为大于80％的PVA；

优选，所述聚氨基酸选自赖氨酸、精氨酸、脯氨酸、苏氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、甘氨酸等中至少一种的均聚物(聚合度≥2)；例如为聚-L-脯氨酸、聚-L-精氨酸中的一种或两种以上的组合；所述聚氨基酸优选聚合度为2-40，更优选聚合度为2-20，例如聚合度为6、8、15、20等；

优选，所述多肽为两种以上不同氨基酸组成，可选自L-Thr-L-Arg(TR),L-Thr-L-Pro(TP),L-Arg-L-Thr(RT),L-Pro-L-Thr(PT)，L-Thr-L-Arg-L-Thr(TRT),L-Thr-L-Pro-L-Thr(TPT),L-Ala-L-Ala-L-Thr(AAT)中的一种或两种以上；

优选，所述糖肽衍生物为葡萄糖内酯(GDL)或其他糖类与亲冰氨基酸通过化学键合而组成的分子，例如：GDL-L-Thr，GDL-L-Gln,GDL-L-Asn,GDL-L-Phe，GDL-L-Tyr，GDL-L-Val，GDL-L-Ser中的至少一种。

6.根据权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于，所述多元醇含量为6.0-28mL；

优选，所述血清含量为0；

优选，所述水溶性糖含量为0.2-0.5mol L^-1；

优选，所述冷冻保存液pH为6.5-7.6。