[发明专利]一种基于酶促拆分法的混菌发酵产D-赖氨酸在审
| 申请号： | 202010172954.6 | 申请日： | 2020-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN111411142A | 公开（公告）日： | 2020-07-14 |
| 发明（设计）人： | 陈可泉;许晟;王昕;冯娇 | 申请（专利权）人： | 南京凯诺生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P41/00 | 分类号： | C12P41/00;C12P13/08;C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京先科专利代理事务所(普通合伙) 32285 | 代理人： | 叶帅东 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 拆分 发酵 赖氨酸 | ||
1.一种基于酶促拆分法的混菌发酵产D-赖氨酸，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，构建重组菌株E.coli BL-pTrc99a-DapA；
步骤2，构建E.coli BL-pET28a-LYR葡萄糖代谢缺陷型菌株；
步骤3，选取重组菌株E.coli BL-pTrc99a-DapA和E.coli BL-pET28a-LYR加入发酵培养基中，以葡萄糖和甘油为碳源，培养至OD约为0.6时用IPTG诱导，继续培养生产DL-赖氨酸；
步骤4，采用含有赖氨酸脱羧酶的粗酶液将DL-赖氨酸中L-赖氨酸转化为1,5-戊二胺，从而获得D-赖氨酸。
2.根据权利要求1所述的一种基于酶促拆分法的混菌发酵产D-赖氨酸，其特征在于，步骤1中E.coli BL-pTrc99a-DapA构建方法为：选取引物，通过PCR复制大肠杆菌MG1655上的二氢吡啶甲酸合酶，再与载体pTrc99a连接，并转入克隆载体Trans1-T1，经过LB平板初筛后，挑点进行菌落PCR验证后测序。
3.根据权利要求1所述的一种基于酶促拆分法的混菌发酵产D-赖氨酸，其特征在于，步骤1中E.coli BL-pET28a-LYR葡萄糖代谢缺陷型菌株构建方法为：将来源于
4.根据权利要求1所述的一种基于酶促拆分法的混菌发酵产D-赖氨酸，其特征在于，步骤2中所述E .coli BL-pET28a-LYR葡萄糖代谢缺陷型菌株构建方法如下：利用Crispr-Cas9编辑技术敲除大肠杆菌BL21（DE3）的磷酸转移酶系统(PTS)
5.据权利要求1所述的一种基于酶促拆分法的混菌发酵产D-赖氨酸，其特征在于，步骤3中所述加入重组菌株E.coli BL-pTrc99a-DapA和E.coli BL-pET28a-LYR的种子液细胞OD比为3：1。
6.根据权利要求1所述的一种基于酶促拆分法的混菌发酵产D-赖氨酸，其特征在于，步骤3中所述葡萄糖和甘油的添加的摩尔比为6：1。
7.根据权利要求1所述的一种基于酶促拆分法的混菌发酵产D-赖氨酸，其特征在于，步骤3中所述诱导温度为35℃。
8.根据权利要求1所述的一种基于酶促拆分法的混菌发酵产D-赖氨酸，其特征在于，步骤4中所述含有赖氨酸脱羧酶的粗酶液中添加的终浓度为1mg/mL。
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