[发明专利]适于冠状病毒保存和稀释复合缓冲液及其应用

说明书

本发明公开了一种复合缓冲液。根据本发明的实施例，该复合缓冲液包括：1‑5mM两性离子缓冲液、0.05‑0.5mM非离子螯合剂、0.002‑0.03质量/体积％非离子型表面活性剂，pH＝7.0‑8.0。该复合缓冲液适于低浓度核酸的保存，有利于核酸保持良好的稳定性和活性。并且，该复合缓冲液有利于核酸抵抗非低吸附处理耗材，降低核酸之间的交缠，和非特异吸附，尤其适于高通量测序的低浓度核酸样本的保存，能显著降低长期反复冻融对样本活性的影响。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及复合缓冲液及其应用，更具体地，涉及复合缓 冲液、试剂盒及其用途，尤其适用于病原微生物如冠状病毒的保存和稀释。

背景技术

目前复合缓冲液的储存浓度一般不建议低于10ng/μL，主要是考虑到在中碱性溶液中核 酸常带负电，容易吸附到带正电的塑料表面上，如果对于不太平整的塑料表面，比表面积会 进一步提高，导致核酸分子滞留在塑料表面的比例提高。低浓度核酸随液体操作次数的增加 丢失得越来越多。最终会造成基于PCR类的高灵敏度的核酸检测灵敏度和准确度下降。

高通量测序的低丰度检测，需要对一个目标区域测到较高的深度，基于成本的考虑，通 常希望去除非目标区域进行测序，这就会在文库构建的过程中用到区域捕获的技术。液相捕 获使用特异性的核酸探针，在特定的盐浓度下，根据探针对特异和非特异区域的融熵温度差 异进行特异性的捕获。常用的液相探针杂交的平台和产品，经常会用到浓缩待富集的文库或 者模板的操作，浓缩倍数从几倍到几十倍。对于常用的核酸洗脱和储存液，含有盐和金属非 离子螯合剂，浓缩后会导致这部分试剂的浓度上升，造成液相捕获特异性和灵敏度的偏差。 因此一般的体系建议使用去离子水进行纯化后的洗脱溶液。而去离子水对于核酸的稳定性和 溶解度，都是不太有利的，尤其不利于长期储存。以及上面描述的第一种情况，也无法得到 很好的解决，导致低丰度的检测稳定性的波动变大。

而对于低浓度的纯的RNA模板，在面临上述问题之外，还另外面临一个问题，就是多 种RNA酶不需要二价盐离子的加入就能对RNA进行水解反应，所以提取好比较纯的RNA模板在浓度低的时候对储存的要求非常苛刻，通常需要-70度的保存，避免反复冻融等，也不能保证RNA模板能进行长期的保存。

由此，现有复合缓冲液有待改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提 出一种复合缓冲液，该复合缓冲液适于低浓度核酸的保存，有利于核酸保持良好的稳定性和 活性。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种复合缓冲液。根据本发明的实施例，该复合 缓冲液包括：1-5mM两性离子缓冲液、0.05-0.5mM非离子螯合剂、0.002-0.03质量/体积％ 非离子型表面活性剂，pH＝7.0-8.0。

发明人惊奇的发现，该复合缓冲液适于低浓度核酸的保存，有利于核酸保持良好的稳定 性和活性。并且，该复合缓冲液有利于核酸抵抗非低吸附处理耗材，降低核酸之间的交缠， 和非特异吸附，尤其适于高通量测序的低浓度核酸样本的保存，能显著降低长期反复冻融对 样本活性的影响。

另外，根据本发明上述实施例的复合缓冲液还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，所述两性离子缓冲液为选自Tris缓冲液，MOPS缓冲液、PIPES 缓冲液和HEPES缓冲液中的至少一种。

根据本发明的实施例，所述核酸为DNA，所述两性离子缓冲液为Tris缓冲液，优选地， 为Tris-盐酸。

根据本发明的实施例，所述核酸为RNA，所述两性离子缓冲液为选自MOPS缓冲液、PIPES缓冲液和HEPES缓冲液的至少一种，优选地，为MOPS缓冲液或PIPES缓冲液。

根据本发明的实施例，所述两性离子缓冲液的浓度为1-3mM。