[发明专利]一种适配体及其在检测PDGF-BB试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了一种适配体及其在检测PDGF‑BB试剂盒中的应用。本发明通过设计一个基于适配体发卡的指数扩增模板，实现均相溶液中PDGF‑BB蛋白的快速灵敏检测，其反应速度快、特异性好、线性范围宽、准确度高，检测限可达4.9fM，可用于微量PDGF蛋白的的检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种基于适配体的恒温指数扩增技术实现均相溶液中快速灵敏检测PDGF-BB蛋白质的方法。

背景技术

血小板生长因子(PDGF)是一种在人血小板中的生长因子蛋白，在已公开的研究中，PDGF一般有多个亚型，如PDGF-AB、PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-CC等。在这些亚型中，PDGF-BB被证实在癌症中过表达，被认为是一种有效的疾病诊断标志物，因此，PDGF-BB的高灵敏检测具有重要意义。

酶联免疫(ELISA)是传统的PDGF-BB检测方法，然而其操作复杂，需要繁琐冗杂的多次清洗，导致试验时间很长，同时该方法依赖于PDGF-BB抗体，受到抗体本身存在的易失活、保存困难和成本高等问题的限制。近年来，核酸适配体替代抗体作为一种识别手段已被广泛用于蛋白质传感器的构建。核酸适配体是一种采用体外指数富集配体技术筛选得到的寡核苷酸片段，它对小分子、蛋白质、细胞等具有特异性结合的能力，与传统抗体相比，具有高选择性、稳定性高和适用性强等优势。以核酸适配体为基础的PDGF-BB检测方法已在荧光、电化学、化学发光和比色等检测平台上得以建立。其中，基于荧光的方法具有仪器简单、操作简单和响应迅速的优点受到广泛的应用。然而，传统基于适配体的测定PDGF-BB的荧光检测方法存在灵敏度有限的问题。

恒温指数扩增反应(Exponential Amplification Reaction，EXPAR)技术近年来备受关注。该技术基于3′端与5′端序列完全相同，且均与引物序列互补的线性模板，在DNA聚合酶和特殊的切口酶(nicking enzyme)共同作用下，可以在恒温条件下对短链核酸(10～25碱基)进行高效、快速的扩增，一般在几分钟内可对目标核酸放大106～109倍，将恒温指数扩增技术与核酸适配体有机结合可有效实现均相溶液中蛋白质的快速灵敏检测。

近年来，研究者建立了多种基于适配体的核酸信号扩增方法，证实了核酸恒温扩增在PDGF-BB检测中极强的信号扩增能力。然而这些方法大都是非均相检测，需要多次洗涤分离或设计多条核酸探针通过分步操作达到灵敏检测的目的，方法耗时长且灵活度低，限制了其应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于适配体的恒温指数扩增技术实现均相溶液中快速灵敏检测PDGF-BB蛋白质的方法。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：

一种识别PDGF-BB蛋白的适配体，其碱基序列为：

5’-CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG-3’(SEQ ID NO.1)。

本发明的第二个方面，提供：

一种包括上述适配体的扩增模板，其还包括引物识别序列、扩增序列和切口酶序列；

其中，上述扩增模板为发卡结构；

上述引物识别序列与上述适配体序列部分互补。

在本发明实施例中，上述扩增序列数量为2个或以上，且核酸序列完全相同；上述切口酶序列数量为2个或以上。

在本发明实施例中，上述扩增模板的溶解温度60℃。

在本发明实施例中，上述扩增模板序列选自以下核苷酸序列中任一条：