[发明专利]一种阿基瑞林的纯化方法

说明书

本发明涉及到一种阿基瑞林的纯化方法。该方法可以有效解决多肽上样量小、成本高、效率低等问题，技术方案如下：一种阿基瑞林的纯化方法，包括如下步骤：1）将多肽产品进行预处理，溶解过滤后为待纯化样品；2)将上述样品进行第一次纯化，所述第一次纯化方法为中压色谱法，其中以多糖凝胶、聚合物微球或者硅胶中的一种为固定相，粒径为10‑40μm，在流动相A和流动相B中，梯度洗脱收集目标馏分纯度90%以上备用；3）上述目标馏分进行第二次纯化，所述第二次纯化方法为反相高效液相色谱法，其中以C18或者C8键合硅胶为固定相，粒径为7‑10μm，在流动相A和流动相B中，梯度洗脱收集合格的馏分；4）用旋转蒸发仪在32‑38℃下旋蒸，冻干后得到合格得产品粉末。

技术领域

本发明涉及多肽纯化方法，特别涉及到一种阿基瑞林的纯化方法。

背景技术

阿基瑞林(Argireline)，又被称为类肉毒杆菌素，是模仿SNAP-25蛋白N端6个氨基酸的寡肽一。多肽序列为Ac-Glu-Glu-Met-Glu-Arg-Arg-NH2，分子式C46H56N12O6,分子量为888.99，结构式如下:

阿基瑞林为高端化妆品常用的原料之一，功效主要是减少由面部表情肌收缩造成的皱纹，对额头或眼睛周围的皱纹有理想的祛除效果。另外，它还能促进胶原蛋白的生成，有助于肌肤组织重建。

阿基瑞林是一种更安全、更廉价、温和的肉毒杆菌毒素替代品。阿基瑞林参与竞争SNAP-25在融泡复合体的位点，从而影响融泡复合体的形成，导致囊泡不能有效释放神经递质，使肌肉收缩减弱，进而可以放松肌肉、舒缓细纹使肌肤呈现清透无暇，也可以促使细胞再生使肌肤恢复柔软弹性，因此被广泛应用于制备化妆品和保健品。

近几年随着人们保健意识的增强，化妆品和保健品市场越来越广阔，阿基瑞林的市场需求也越来越大。

中国专利201310755456.公开了“一种阿基瑞林的制备方法”，该方法通过固相合成法制备阿基瑞林，制备步骤较为繁琐，纯化存在多肽上样量小、成本高等技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供到一种阿基瑞林的纯化方法，该方法可以有效解决多肽上样量小、成本高、效率低等技术问题，同时还可以保证收率和产品质量。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种阿基瑞林的纯化方法，包括如下步骤：

1）将多肽阿基瑞林产品进行预处理，溶解过滤后为待纯化样品；

2) 将上述样品进行第一次纯化，所述第一次纯化方法为中压色谱法，其中以多糖凝胶、聚合物微球或者硅胶中的一种为固定相，粒径为10-40μm，在流动相A和流动相B中，梯度洗脱收集目标馏分纯度90%以上备用；

3）上述目标馏分进行第二次纯化，所述第二次纯化方法为反相高效液相色谱法，其中以C18或者C8键合硅胶为固定相，粒径为7-10μm，在流动相A和流动相B中，梯度洗脱收集合格的馏分；

4）用旋转蒸发仪在32-38℃下旋蒸，冻干后得到合格得产品粉末。

所述步骤1）样品的预处理方法为将阿基瑞林样品溶解于甲醇水溶液，过滤后待纯化。

优选的方案是：所述步骤2）中粒径为15-25μm。

优选的方案是：所述步骤2）流动相A为三氟乙酸、甲酸铵、甲酸吡啶或乙酸铵中的一种。

优选的方案是：所述步骤2）流动相B为甲醇、乙腈、乙醇或二氯甲烷中的一种。

优选的方案是：流动相A为体积百分比0.1%乙酸铵水溶液；所述步骤3）流动相B为甲醇、乙腈或乙醇中的一种。