[发明专利]一种可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白及应用

说明书

本发明涉及生物技术中蛋白表达技术领域，特别涉及一种可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白。该可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白制成的铝胶佐剂疫苗比油佐剂疫苗安全效果好，免疫后猪体吸收快，应激小，比201佐剂免疫保护率高。

技术领域

本发明涉及生物技术中蛋白表达技术领域，特别涉及一种可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白，还涉及可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白的应用。

背景技术

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2，PCV2)是近年来新发现的、危害养猪业较严重的病毒之一，该病毒与猪的多种疾病综合征密切相关，包括猪断奶后多系统衰竭综合征(Post-weaning multi-systemic wasting syndrome，PMWS)和母猪的繁殖障碍(Sowabort ion and mortali ty syndrome，SAMS)等。自1991年加拿大首次报道PMWS以来，该病现已波及世界各地在2010年国际猪兽医大会(IPVS)上，猪圆环病毒感染成为关注度最高的疾病，是全球公认的危害养猪业的重要传染病之一。近年来，国内猪圆环病毒感染呈上升趋势，在我国猪群中流行十分严重，给我国养猪业造成了重大的经济损失。

PCV2基因组全长1767bp或1768bp，共包含11个开放阅读框(ORF)，其中ORF1、ORF2是两个最大的开放阅读框，分别编码复制相关蛋白(Rep蛋白)和衣壳蛋白(Cap蛋白)。Cap蛋白是主要的结构蛋白，研究表明其N端含有一个由41个氨基酸残基组成的核定位信号(NLS)，且含有大量的大肠埃希菌稀有密码子，这将严重影响外源蛋白的表达。相关研究证实，Cap 蛋白免疫动物可以产生病毒的中和抗体。ORF2基因已经作为研制基因工程疫苗的重点对象。但是，目前Cap蛋白在原核表达系统中的表达情况多以包涵体形式表达，对蛋白的纯化带来不便，其反应原性和免疫原性亦不如可溶性蛋白好，因此研制可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白是扩大其免疫应用的一个重要研究方向。

发明内容

为了解决以上现有技术中猪圆环病毒2型Cap蛋白包涵体的问题，本申请提供了一种可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白，表达此可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白的猪圆环病毒2型ORF2 基因。如果蛋白具有可溶性，即可增强活性蛋白的比例，不用再经过蛋白复性等繁琐的过程，而且适合生物制品企业大规模生产。

本发明还提供了可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白的应用。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种猪圆环病毒2型ORF2基因，其核苷酸序列见序列表中序列1。

一种序列表中序列1表达得到的可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白。

优选所述的可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白，1L细菌培养液中可溶性猪圆环病毒2型 Cap蛋白表达量为36.75mg。

优选所述的可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白在制备免疫制剂中的应用。

优选所述免疫制剂为猪圆环病毒2型Cap蛋白灭活疫苗。

优选灭活疫苗中佐剂为油佐剂、201佐剂或铝胶佐剂。

优选灭活疫苗中可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白浓度为100ug/ml。

本发明的有益效果：

通过对ORF2基因进行剪接、修饰，将稀有密码子进行优化，得到优化后的猪圆环病毒2型 ORF2基因，其表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白具有可溶性，增强了活性蛋白的比例，不用再经过蛋白复性等繁琐的过程，而且适合生物制品企业大规模生产。该可溶性猪圆环病毒2 型Cap蛋白制成的铝胶佐剂疫苗比油佐剂疫苗安全效果好，免疫后猪体吸收快，应激小，比 201佐剂免疫保护率高。

附图说明

图1为目的基因优化前后核苷酸序列对比图，上为优化前序列，下为优化后序列，