[发明专利]一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒，包括：金电极、MPA溶液、cAb溶液、dAb溶液、PBS缓冲液、BSA溶液、LiClOsubgt;4/subgt;溶液、GO‑PolyFc溶液、EDC/NHS混合溶液A和EDC/NHS混合溶液B。本发明利用功能化GO具有多引发位点的特性将其应用于ROP反应中，作为引发剂以提高单体聚合能力，大量二茂铁单体通过ROP反应连接聚合，最后，通过电化学工作站测定的氧化电流强度与CYFRA 21‑1浓度呈正相关，成功构建了基于功能化GO引发开环聚合反应信号放大的标志物CYFRA 21‑1的检测试剂盒。本试剂盒对肺癌生物标志物CYFRA 21‑1的检测具有灵敏度高，稳定性高，抗干扰性强等特点，为肺癌的临床检测开辟了新的途径。

技术领域

本发明涉及一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒，属于生物分析技术领域。

背景技术

由于早期诊断和预后不良，肺癌是威胁人类生命的最常见恶性肿瘤。肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)两种主要亚型，其中NSCLC约占80％。肿瘤标志物提供了一种有效的方法用于癌症的筛查、诊断、预后。细胞角蛋白片段抗原21-1(CYFRA 21-1)被认为是诊断NSCLC最重要的生物标志物。在过去的几十年中，已报道了多种用于肿瘤标志物测定的技术，例如免疫放射测定(IRMA)、表面等离子体共振(SPR)、酶联法免疫吸附测定(ELISA)、电化学免疫测定等。在这些策略中，电化学免疫传感器由于其易小型化、仪器简单和信号量化等特点受到了广泛的关注。常规的电化学免疫传感方法只能结合或封闭一个二茂铁标签或Tyr残基，因而灵敏度较低。

为了提高检测灵敏度，已经提出了一些技术，例如金属纳米颗粒，天然酶或聚合物链。但是酶的高成本和纳米材料的操作复杂限制了它们的应用范围。基于聚合的扩增策略由于低成本、高效、简单，被认为是一种有效的信号放大方法。其中以阳离子引发为基础的开环聚合(ROP)，聚合物分子中的C-C键和C-O键能够自由旋转使得聚合物具有良好的柔性、低的溶解温度和高的降解温度，这使聚合物常被用在药物控制释放领域以及生物降解领域。此外，氧化石墨烯(GO)由于具有多官能团和高表面积，使其适合构建固定各种分子。通过乙醇胺(ETA)制备羟基官能化的GO，可为ROP提供丰富的引发位点，有效提高聚合效率。目前，还没有基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒的相关报道。

发明内容

针对目前存在非小细胞肺癌高灵敏检测的问题，本发明的目的是提供一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：一种基于羟基功能化氧化石墨烯引发开环聚合反应信号放大的肺癌早期诊断试剂盒，包括：金电极、MPA溶液、cAb溶液、dAb溶液、PBS缓冲液、BSA溶液、LiClO₄溶液、GO-PolyFc溶液、EDC/NHS混合溶液A和EDC/NHS混合溶液B。

MPA溶液浓度为20mM，cAb溶液浓度为1μg/mL，dAb溶液浓度为1μg/mL，BSA溶液质量浓度为1％，PBS缓冲液浓度为0.1mM，pH为7.4，LiClO₄溶液浓度为1M，GO-PolyFc溶液浓度为9.5mg/mL，EDC/NHS混合溶液A中EDC浓度为0.2M，NHS浓度为0.05M，EDC/NHS混合溶液B中EDC浓度为8mM，NHS浓度为2mM。

肺癌早期诊断试剂盒，还包括水虎鱼酸和0.5M稀盐酸，水虎鱼酸的制备方法为：98％H₂SO₄和H₂O₂以体积比3:1的比例混合。

肺癌早期诊断试剂盒，还包括0.3μm和0.05μm抛光粉。