[发明专利]黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用

权利要求书

1.黄芪甲苷(AS-IV)在制备促进血管新生药物中的应用。

2.如权利要求1所述黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于，所述的促进血管新生是通过促进人内皮祖细胞(EPCs)分泌外泌体(Exos)和血管生长因子实现的。

3.如权利要求2所述黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于，所述黄芪甲苷促进人EPCs分泌外泌体和血管生长因子的方法包括：

S1、从细胞库中选取P3-P6代的人内皮祖细胞复苏，将复苏后的EPCs培养于包被有人纤维连接蛋白的培养板，采用M199培养基预培养EPCs 24h；

S2、取贴壁细胞，用消化酶消化离心后重悬，待EPCs再次贴壁后，用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗细胞后，采用含有人血清替代物的去胎牛血清(FBS)的EGM-2MV培养基培养，加入黄芪甲苷与EPCs进行联合培养48h；

S3、收集细胞培养上清液，先离心l0min去除残存细胞，再离心20min以去除细胞碎片；

S4、收集离心后的细胞上清液，浓缩得到富含人内皮祖细胞外泌体(EPC-Exos)和血管生长因子的细胞悬液。

4.如权利要求3所述黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于，所述步骤S2中黄芪甲苷的浓度为100～400mg/L。

5.如权利要求3所述黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于，所述步骤S2中黄芪甲苷的浓度为100mg/L。

6.如权利要求3所述黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于，步骤S1中M199培养基含20％胎牛血清、血管内皮生长因子(VEGF)10mg/L、青霉素100kU/L和链霉素100kU/L。

7.如权利要求1或2所述黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于，所述促进血管新生药物为含人内皮祖细胞外泌体和血管生长因子的水凝胶。

8.根据权利要求7所述黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于，所述水凝胶中人内皮祖细胞外泌体中负载有与血管新生相关的miR-126-3p、miR-126-5p、miR-21、miR-146a、miR-210、miR-155、miR-214，外泌体的粒径为88.7-123.5nm，浓度为100-1000mg/ml。

9.根据权利要求7所述黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于，所述血管生长因子包括VEGFa、VEGFb、VEGFc、FGF和Ang-1。

10.根据权利要求7所述黄芪甲苷在制备促进血管新生药物中的应用，其特征在于，所述水凝胶还包括稳定剂、保湿剂、水凝胶基质、PH调节剂和等渗剂。