[发明专利]一种ADGRG6增强子突变的核酸检测方法及其试剂盒在审
| 申请号： | 202010176758.6 | 申请日： | 2020-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN111455046A | 公开（公告）日： | 2020-07-28 |
| 发明（设计）人： | 吴松;王熵;李宇清;欧铜;陆冬冬 | 申请（专利权）人： | 深圳市罗湖区人民医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市君胜知识产权代理事务所(普通合伙) 44268 | 代理人： | 朱阳波 |
| 地址： | 518001 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 adgrg6 增强 突变 核酸 检测 方法 及其 试剂盒 | ||
1.一种ADGRG6增强子突变的核酸检测方法，其特征在于，包括步骤：
提供待测DNA；
以引物对P对所述待测DNA进行扩增，得到扩增产物；
将Cas12a蛋白、缓冲液、crRNA与FAM-TTTTTT-BHQ探针混合形成预混液；所述crRNA为5'-AAU UUC UAC UGU UGU AGA UUU GUA UGU UUA UAC AAA-3'；
将所述扩增产物加入所述预混液中，进行荧光定量测量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述ADGRG6增强子突变为ADGRG6位点chr.6:142，706，206位为GA；和/或
所述引物对P为F：5'-TTC CAG CAA CCC CCA AGA AA-3'，R:5'-CAG CTC CAC TCC ACCAAG TC-3'。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述扩增的方式为PCR扩增或等温扩增。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增包括步骤：
将所述待测DNA置于PCR扩增体系，于95℃进行扩增5min；
然后依次按照95℃，15s；58℃，15s；72℃，15s进行扩增，重复35～45次；
最后于72℃进行扩增2min。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述crRNA由化学合成法制备得到。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述荧光定量测量采用荧光定量PCR法。
7.一种ADGRG6增强子突变的核酸检测用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测标志物为ADGRG6增强子突变，包括针对所述ADGRG6增强子突变设计的用于扩增待测DNA的引物对P，以及由Cas12a蛋白、缓冲液、crRNA和FAM-TTTTTT-BHQ探针构成的预混液；所述crRNA为5'-AAU UUC UAC UGU UGU AGA UUU GUA UGU UUA UAC AAA-3'。
8.根据权利要求7所述的ADGRG6增强子突变的核酸检测用试剂盒，其特征在于，所述ADGRG6增强子突变为ADGRG6位点chr.6:142，706，206位为GA；和/或
所述引物对P为F：5'-TTC CAG CAA CCC CCA AGA AA-3'，R:5'-CAG CTC CAC TCC ACCAAG TC-3'。
9.根据权利要求7所述的ADGRG6增强子突变的核酸检测用试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为Buffer，10X。
10.根据权利要求9所述的ADGRG6增强子突变的核酸检测用试剂盒，其特征在于，所述crRNA的浓度大于150nM。
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