[发明专利]一种鉴定三疣梭子蟹遗传性别的方法

说明书

本发明提供一种鉴定三疣梭子蟹遗传性别的方法，其中使用了用于鉴别三疣梭子蟹性别的SNP位点，所述的SNP位点位于序列为SEQ ID NO:1片段；或由SEQ ID NO:1取代、缺失、添加一个或几个核苷酸，由SEQ ID NO:1衍生片段的第1452位，为1452AG。本发明所提供的SNP位点分子标记在雄性个体中呈现二等位基因杂合型，而在雌性个体中均呈现等位基因纯合型，可以采用PCR扩增测序方法或KASP方法进行检测。检测方法灵活，结果稳定，其中KASP检测方法通量较高，检测速度快，应用简单，为三疣梭子蟹全雌苗种的繁育提供重要工具。

技术领域

本发明属于水产生物遗传育种技术领域，具体涉及一种鉴定三疣梭子蟹遗传性别的方法。

背景技术

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)广泛分布于中国、朝鲜、日本等海域，是一种重要的大型海产经济蟹类。中国自20世纪90年代开始三疣梭子蟹的人工养殖，由于其口感好、营养丰富，深受大众喜爱，而且雌性红膏蟹市场价格远高于雄蟹。因此，进行三疣梭子蟹全雌单性养殖，具有良好的市场前景。性别连锁分子标记的开发有利于快速鉴定性反转个体，加快全雌三疣梭子蟹育种进程。

分子标记技术是一个用来鉴定遗传性别的有效工具。单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，SNP)作为第三代分子标记在基因分型中得到了广泛的应用。竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele-specific PCR,KASP)，是基于等位基因特异性寡核苷酸延伸和荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)信号的单个SNP基因分型方法之一，已成为一项全球性的基准技术，具有高通量、低成本、高灵敏度和特异性等特点。

发明内容

本发明提供一种鉴定三疣梭子蟹遗传性别的方法，其中使用了用于鉴别三疣梭子蟹性别的分子标记，可快速进行高通量的性别鉴定，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种三疣梭子蟹性别鉴定标记的SNP位点(PtS1)，所述的SNP位点位于序列为SEQ ID NO:1片段；或由SEQ ID NO:1取代、缺失、添加一个或几个核苷酸，由SEQID NO:1衍生片段的第1452位，为1452AG。

本发明还提供用于三疣梭子蟹性别鉴定的分子试剂，所述的试剂用于检测上述的SNP位点；

所述的分子试剂，其一种是用于PCR扩增测序方法的试剂；另一种是用于KASP检测方法的试剂；

其中用于PCR扩增测序方法的试剂，包含有用于检测上述SNP位点的PCR扩增测序的引物对，其序列信息如下：

PS7 Forward：5'-TTAAGTTTGAGTATTGAGTATCCAC-3'(SEQ ID NO:2)、

PS7 Reverse：5'-AATGAGAAGTATTGTAAATGATGTT-3'(SEQ ID NO:3)；

其中用于KASP检测方法的试剂，其中包含有如下的引物：

PtS1FAM(SEQ ID NO:4)：

GAAGGTGACCAAGTTCATGCTATTTTTGTACACTACACCTCCCCC、PtS1HEX(SEQ ID NO:5)：

GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTTTGTACACTACACCTCCCCT、PtS1C(SEQ ID NO:6)：GCTAGAAAGGGRTGTAGCAAACAAGTT；

本发明再一个方面提供检测三疣梭子蟹的雌雄性别的方法，是通过检测上述的SNP位点来辨别三疣梭子蟹的雌雄性别；