[发明专利]一种新金分枝杆菌及其在制备9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3酮中的应用

说明书

本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种新金分枝杆菌及其在制备9α‑羟基‑20α‑羟甲基‑孕甾‑4‑烯‑3酮中的应用。新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)，分类命名为Mycobacterium neoaurum BK076，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM20191115。该菌株是经过诱变筛选后得到的新菌株，能够高效转化甾醇类物质生产9α‑羟基‑20α‑羟甲基‑孕甾‑4‑烯‑3‑酮，底物植物甾醇转化率达到90％以上，发酵液中9α‑羟基‑20α‑羟甲基‑孕甾‑4‑烯‑3酮的浓度可以达到36g/L以上，转化率高达85％以上。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种新金分枝杆菌及其在制备9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3酮中的应用。

背景技术

甾体类药物是一种临床上必不可少的药物，其指的是类固醇类物质，通常包括肾上腺皮素、雄激素、雌激素等，其可以对机体起到非常重要的调节作用，如肾上腺皮质激素具有抗炎症、抗过敏、抗休克、抗变态反应等功效，被广泛用于治疗类风湿性关节炎、支气管哮喘和湿疹等皮肤病，可治疗和缓解胶原性疾病、过敏性休克等难治或危险性疾病，也是治疗爱迪森氏等内分泌疾病的不可缺少的药物。总的来说，甾体激素类药物具有很强的抗感染、抗过敏、抗病毒和抗休克等重要作用，因此常常被誉为“生命的钥匙”。

不同的甾体药物分子结构均由甾体类药物中间体衍生而来。其中，9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮，英文名称pregn-4-en-3-one,9,21-dihydroxy-20methyl(简称9OH-BA，CAS号：69155-84-6)，是一种关键的甾体类药物中间体，在甾体工业化生产中起着重要作用。利用9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮为前体物可以合成多种甾体激素原料药，如高效含卤(氟、氯)糖皮质激素，地塞米松、倍他米松、康酸莫米松等，氢化可的松、17α-OH黄体酮、依普利酮、β米松、可的松等多种甾体原料药，且以9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮为前体物合成甾体类原料药在工艺路线上及成本上更具优势，因此9OH-BA具有重要的商业价值。

故提供一种能够快速高效生产9OH-BA的方法是目前的研究重点。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的9OA-BA不能快速高效的生产的缺陷，从而提供一种新金分枝杆菌及其在制备9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3酮中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)，分类命名为Mycobacteriumneoaurum BK076，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 20191115。

上述的新金分枝杆菌在制备9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮中的应用。

一种9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮的制备方法，包括使用上述的新金分枝杆菌将甾醇类物质转化为9α-羟基-20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮的步骤。

进一步的，所述甾醇类物质包括植物甾醇、动物甾醇、木甾醇和胆固醇中的至少一种。

进一步的，所述新金分枝杆菌的种子在含有甾醇类物质的转化培养基中发酵培养的条件为：种子接种量为5-15％(V/V)，培养温度为30-34℃，转化培养基的pH值为6.5-8.5，通气量为0.05-1.5vvm，搅拌速率为200-400r/min，发酵时间为100-150h。

进一步的，所述转化培养基包括以下组分：甾醇类物质30-50g/L、碳源15-50g/L、氮源20-80g/L、聚乙二醇和聚二甲基硅氧烷混合物40-100g/L、无机盐2-30g/L、乳化剂5-15g/L和泡敌5-10g/L。

进一步的，