[发明专利]一种分子鉴别虹鳟雌核发育后代的方法

说明书

本发明提供一种分子鉴别虹鳟雌核发育后代的方法，其方法为：选取美洲红点鲑、虹鳟雌核发育子代的尾鳍提取基因组DNA，然后通过PCR反应体系及程序、PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染后，通过显示条带上的泳道中是否含有雄性父本的标记验证来鉴别虹鳟雌核发育后代情况。本发明是通过应用筛选出的分子标记AOMM108开展虹鳟雌核发育后代的筛选，从虹鳟幼鱼期就能够较早的开始鉴别雌核发育后代，降低养殖后期造成的经济损失，提高选育效果。该方法简单、快捷，准确率高，在虹鳟遗传育种领域中能够发挥重要作用。

技术领域

本发明属于水产遗传育种技术领域，具体涉及一种分子鉴别虹鳟雌核发育后代的方法。

背景技术

鱼类雌核发育技术在水产养殖领域具有极重要的应用价值，人工诱导鱼类雌核发育就是用遗传失活的精子激活卵子后，再通过抑制受精卵的极体排除或第一次卵裂，而发育成子代的一种特殊的有性生殖方式。虹鳟的雄鱼一般2龄达到性成熟，雌鱼3龄性成熟。成熟后的个体表现出生长率降低，死亡率提高，同时肉质和外观都较差等特性，对养殖生产不利。采用美洲红点鲑的精子进行异源精子诱导虹鳟雌核发育获得的后代全为雌鱼的种群，能够减少不利影响，同时还可为下一步的育种工作提供育种材料。但是实验后代的外部形态很难区分开是否是真正的雌核发育后代，尤其是在幼鱼期，目前还没有一种有效的手段来准确鉴别虹鳟的雌核发育后代。由于杂交后代的个体是不育的，这给育种工作造成了很大的浪费，这也是虹鳟育种工作上的一个难题，因此，较早的高效准确鉴定出虹鳟雌核发育后代是需要解决的核心问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的问题，而提供一种分子鉴别虹鳟雌核发育后代的方法，本发明利用新开发的分子标记将实验后代中混入父本遗传物质的个体准确鉴定出来，该方法是一种操作简单、成本低、准确率高的鉴别虹鳟雌核发育后代的分子方法。

为解决本发明的技术问题采用如下技术方案：

一种分子鉴别虹鳟雌核发育后代的方法，其方法为：选取美洲红点鲑、虹鳟雌核发育子代的尾鳍提取基因组DNA，然后通过PCR反应体系及程序、PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染后，通过显示条带上的泳道中是否含有雄性父本的标记验证来鉴别虹鳟雌核发育后代情况；

其中PCR反应体系中的引物为AOMM108，

F:GGAGGCAGCTCCTGTTTTC，R:GCTGCGCCATCTCTCTATCT。

所述PCR反应体系为：总体系为13 μL，其中2倍浓度的PCR预混酶6.5 μL； TaqDNA聚合酶：0.1U/ML；氯化镁：4mmol/L；dNTP混合物：0.4mmol/L，两条为10mmol/L的引物各0.5 μL；0.5 μL DNA模板；其余双蒸水补足；

所述PCR反应程序为：94℃预变性3 min；94℃预变性35 s，59℃退火温度45 s，72℃延伸45 s，共30个循环；反应结束后在72℃再延伸8 min。

上述分子鉴别虹鳟雌核发育后代的方法，其具体方法如下：

（1）、DNA的提取与检测

采集美洲红点鲑、虹鳟雌核发育子代的尾鳍样本，采用高盐浓度抽提法提取基因组DNA；

（2）、引物设计

1对引物为AOMM108，F:GGAGGCAGCTCCTGTTTTCT，R:GCTGCGCCATCTCTCTATCT；

（3）、PCR反应体系及程序