[发明专利]山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白及间接ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了一种山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白87.1及间接ELISA试剂盒，所述蛋白87.1具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列，所述山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白87.1制备的间接ELISA抗体检测试剂盒包括抗原蛋白87.1包被的酶标板、样品稀释液、阳性血清、阴性血清、洗涤液、封闭液、兔抗羊二抗、底物显色液、终止液。抗原蛋白87.1的包被量为625ng/孔，阳性血清和阴性血清的稀释度均为1/100。本发明提供的Mccp特异性蛋白87.1制备的间接ELISA试剂盒具有良好特异性，与Mccp阳性血清反应，且不与Mmc、Mcc阳性血清反应。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白及间接ELISA试剂盒。

背景技术

山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolumsubsp.capripneumoniae,Mccp) 引起山羊的一类严重的呼吸道疾病，被世界动物组织(OIE)列为法定报告动物传染病之一。Mccp属于丝状支原体簇，该簇成员具有高度的血清学和基因组学相似性，除Mccp外，还包括：丝状支原体丝状亚种(M.mycoides subsp.mycoides,Mmm)，丝状支原体山羊亚种(M.mycoidessubsp.capri,Mmc)，山羊支原体山羊亚种(M.capricolumsubsp.Capricolum,Mcc)，李奇氏支原体(M.Leachii, Ml)，其中Mmm和Ml是牛源支原体，Mmc、Mcc以及Mccp为羊源支原体，均能引起羊肺炎。与Mccp亲缘关系最近的是Mcc和Ml，易与Mccp在血清学检测中产生交叉反应。决定血清学诊断方法特异性和敏感性的关键是抗原，主要通过两个方向挖掘Mccp特异性抗原，一方面，随着基因组测序技术的快速发展，10株Mccp菌株的完整基因组序列已被解析。有报道指出26个潜在毒力因子，并表明其能被宿主免疫系统识别，可作为潜在的血清学诊断靶标。另一方面，从蛋白水平上进行，通过IgG免疫印迹试验，发现实验感染血清和25份田间血清均在44、40和23Kd处出现条带，大多数血清中观察到108、70 和62Kd条带；又通过2D电泳质谱分析以及western blot比较蛋白组学方法得到丝状支原体山羊亚种6个候选诊断蛋白，这些蛋白包括丙酮酸脱氢酶复合物、磷酸甘氨酸激酶、吡啶-核苷磷酸酶、30S核糖体蛋白S6、二磷酸三乙酯和酰胺乙酰转移酶。这些都可作为Mccp特异性抗原候选靶标，但是目前还没有报道指出以这些候选抗原是否能够进一步加以应用。

发明内容

针对上述背景技术中指出的不足，本发明提供了一种山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白及间接ELISA试剂盒，能与Mccp阳性血清反应且不与Mmc、 Mcc阳性血清反应，具有良好的特异性。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白，其表达序列为蛋白87.1序列，所述蛋白87.1具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列。

本发明进一步提供了一种山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白在制备山羊支原体山羊肺炎亚种间接ELISA抗体检测试剂盒中的应用。

本发明进一步提供了上述山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白制备的间接ELISA抗体检测试剂盒，该试剂盒包括抗原蛋白87.1包被的酶标板、样品稀释液、阳性血清、阴性血清、洗涤液、封闭液、兔抗羊二抗、底物显色液、终止液。

优选地，所述抗原蛋白87.1的包被量为625ng/孔，阳性血清和阴性血清的稀释度均为1/100。

相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：