[发明专利]非洲猪瘟病毒嵌合蛋白、疫苗组合物、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种非洲猪瘟病毒嵌合蛋白，其特征在于，所述嵌合蛋白包含：

1）非洲猪瘟病毒p72结构域Ⅰ，所述结构域Ⅰ氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

2）非洲猪瘟病毒p72结构域Ⅱ，所述结构域Ⅱ氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；

3）非洲猪瘟病毒p72结构域Ⅲ，所述结构域Ⅲ氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；以及

4）非洲猪瘟病毒抗原性蛋白；

5）非洲猪瘟病毒p72结构域Ⅰ位于嵌合蛋白的N端，结构域Ⅲ位于嵌合蛋白的C端，结构域Ⅱ位于结构域Ⅰ与结构域Ⅲ之间，非洲猪瘟病毒抗原性蛋白位于非洲猪瘟病毒p72结构域Ⅰ与结构域Ⅱ之间和/或结构域Ⅱ与结构域Ⅲ之间任意位置；

其中，所述非洲猪瘟病毒抗原性蛋白为p54蛋白片段、p30蛋白片段、CD2v蛋白片段和p12蛋白片段中的一种或多种；

所述p54蛋白片段选自如SEQ ID NO.5、6、7、8、9、10、11、12所示任意一个或多个；

所述p30蛋白片段选自如SEQ ID NO.13、14、15、16、17、19所示任意一个或多个；

所述CD2v蛋白片段选自如SEQ ID NO.20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30所示任意一个或多个；

所述p12蛋白片段选自如SEQ ID NO.31、32、33、34、35、36、37所示任意一个或多个；

所述非洲猪瘟病毒嵌合蛋白各结构域之间由柔性连接肽连接，所述柔性连接肽的长度为4-10个氨基酸。

2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒嵌合蛋白，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒嵌合蛋白C端还包含T细胞免疫激活表位，所述T细胞免疫激活表位包括霍乱类毒素T细胞表位和/或白喉毒素T细胞表位和/或破伤风类毒素T细胞表位和/或大肠杆菌不耐热肠毒素T细胞表位。

3.根据权利要求2所述的非洲猪瘟病毒嵌合蛋白，其特征在于，所述白喉毒素T细胞表位选自如SEQ ID NO.59、60、61、62、63、64、65所示任意一个或多个；

所述破伤风类毒素T细胞表位选自如SEQ ID NO.66、67、68、69、70、71、72、73、74、75所示任意一个或多个。

4.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒嵌合蛋白，其特征在于，所述柔性连接肽为GGGS。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的非洲猪瘟病毒嵌合蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

1）人工合成所述非洲猪瘟病毒嵌合蛋白基因，通过基因工程手段连接至克隆载体即嵌合蛋白的克隆载体；

2）将构建的所述嵌合蛋白的克隆载体以及表达载体通过酶切，构建包含嵌合蛋白基因的表达载体即嵌合蛋白的表达载体；

3）将所述嵌合蛋白的表达载体导入受体菌进行诱导表达，并对表达的嵌合蛋白进行鉴定以获得非洲猪瘟病毒嵌合蛋白。

6.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码权利要求1-4任一项所述的非洲猪瘟病毒嵌合蛋白。

7.一种表达载体，所述表达载体含有权利要求6所述多核苷酸。

8.一种非洲猪瘟病毒疫苗组合物，包括免疫量的权利要求1-4任一项所述非洲猪瘟病毒嵌合蛋白及药学上可接受的载体。

9.根据权利要求8所述的非洲猪瘟病毒疫苗组合物，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒嵌合蛋白含量为100- 300μg/ml。

10.根据权利要求8所述的非洲猪瘟病毒疫苗组合物，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒嵌合蛋白含量为200μg/ml。