[发明专利]抗HPV16E7蛋白单抗69E2、杂交瘤细胞株及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了抗HPV16E7蛋白单抗69E2、杂交瘤细胞株及其制备方法和应用，该杂交瘤细胞保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：C2019181，该杂交瘤细胞能够分泌效价高的单克隆抗体，获得抗体能够与HPV16阳性的细胞株CaSki和HPV16阳性宫颈癌鳞癌石蜡组织切片反应，具有很好的特异性；可以作为ELISA试剂盒、免疫化学试剂盒、免疫荧光试剂盒、化学发光免疫分析检测试剂盒等的检测试剂。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，具体涉及分泌抗HPV16E7蛋白单抗69E2的杂交瘤细胞，还涉及由该细胞分泌的单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

宫颈癌是全球妇女癌症中居第四位的癌症，每年新增530，000病例和死亡275，000例，这些病例中大约85％来源于发展中国家。在中国，宫颈癌发病率居女性生殖道恶性肿瘤的首位。宫颈的高危型人乳头瘤病毒(High risk human papillomavirus，HR-HPV)的持续性感染是导致宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的直接病因，其中HPV16型最高，占53％。HPVE7蛋白是HPV致癌的关键分子，E7致癌蛋白选择性表达在肿瘤细胞中，不在正常细胞中表达，随着宫颈上皮内瘤CIN从低级别向高级别(从CIN1经历CIN2、CIN3到侵蚀性宫颈癌)进展，E7致癌蛋白的表达向外层推进越明显且表达量越来越高，最终致癌蛋白E7蛋白出现在宫颈脱落细胞中。HR-HPVDNA检测联合细胞学检查(如TCT)，可以增加宫颈上皮内瘤变CIN3的检出率并减少宫颈癌的发生，共同检测方法也可增加宫颈原位腺癌和浸润性宫颈腺癌的检出率。对30～65岁女性进行细胞学和HPVDNA共同检测，不可避免会出现少部分细胞学检查结果阴性但HR-HPVDNA检测阳性者。美国最新的宫颈癌筛查指南提供了2种方案：(1)在12个月时重复细胞学和HR—HPVDNA共同检测。如果重复共同检测时HPV阳性或细胞学检查结果为LSIL或更严重者，则应行阴道镜检查；(2)立即行HPV基因分型检测(HPVl6或HPVl8)。新的筛查指南对HR—HPVDNA检测结果阳性者缺乏肯定、一致的处理方案，而且阴道镜检查是有创伤的检查，也增加患者心理负担和经济负担，主要因为对于细胞学阴性而HR-HPV的DNA检测阳性患者不能预测哪些患者最终发展为宫颈内瘤变CIN1、CIN2、CIN3和宫颈浸润癌，如果针对那些细胞学检查结果阴性但HR-HPV的DNA检测阳性的妇女，补充检测HR-HPV的E7致癌蛋白比如HPV16E7、HPV18E7致癌蛋白等，很可能在宫颈上皮内瘤CIN2、CIN3时期甚至CIN1时期就发现有癌细胞的存在，最终达到早期预警、早期诊断和早期治疗宫颈癌的目的。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗HPV16E7蛋白单抗69E2；本发明的目的之二在于提供分泌抗HPV16E7蛋白单抗69E2的杂交瘤细胞；本发明的目的之三在于提供所述抗HPV16E7蛋白单抗69E2的制备方法；本发明的目的之四在于提供所述抗HPV16E7蛋白单抗69E2制备检测HPV16E7蛋白的试剂盒中的应用；本发明的目的之五在于提供含有所述抗HPV16E7蛋白单抗69E2的试剂盒。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、抗HPV16E7蛋白单抗69E2，所述单抗69E2包括重链和轻链，所述重链的可变区CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6的第50-54位、第69～85位、第118-127位所示；所述轻链的可变区CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO.8的第46-55位、第71-77位和第110-118位所示。

优选的，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

优选的，所述重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

优选的，所述单抗由杂交瘤细胞株HPV16E7-69E2分泌，保藏号为CCTCC NO：C2019181。