[发明专利]miRNA及其靶基因在肝癌中的应用

说明书

本发明公开了miRNA及其靶基因在肝癌中的应用，属于分子生物学领域。本发明公开了miR‑30a‑3p在肝癌细胞中表达显著下降，其靶基因COX‑2在肝癌细胞中表达显著升高。miRNA及其对应的靶基因可帮助学者深入了解miRNA在肝癌病理中的作用，有助于从理论上研究肝癌，并有望开发新型靶向药物，为寻找新型肝癌诊断相关的肿瘤标记物或新的治疗策略对于肝癌的控制提供新的方向。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，特别涉及miRNA及其靶基因在肝癌中的应用、应用其的产品及检测方法。

背景技术

原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC，全文简称为肝癌)是全球常见的恶性肿瘤之一，死亡人数位居恶性肿瘤死亡人数的第2位。肝癌的发病率居全国恶性肿瘤发病率的第四位，而且肝癌新发例数以及因肝癌死亡的人数不断升高。目前肝癌治疗主要以手术为主，结合放疗、化疗、生物免疫治疗等治疗手段。虽然治疗手段不断改进，但肝癌的五年生存率仍很低，约为14.1％。

miRNA是调节基因表达的内源性非编码小分子RNA，在转录后水平对基因表达进行调控，参与了细胞周期、凋亡、发育、分化和新陈代谢等生理过程。miRNA在细胞中表达失调会引发肝癌等疾病的产生。但是，miRNA与肝癌的发生、发展的关系仍有待考证。

miRNA与靶mRNA的典型作用方式主要有两种。在大多数情况下，复合物中的单链miRNA与靶mRNA的3’UTR不完全互补配对，阻断靶基因的翻译，从而调节基因表达。这种方式主要影响了蛋白表达水平，但不影响mRNA的稳定性。另一种作用方式与siRNA类似，当miRNA与mRNA完全互补配对时，Ago2蛋白通过切割mRNA直接导致其降解，从而实现基因沉默。

综上，研究认为miRNA与目的基因的结合作用和miRNA与目的基因的配对程度有关。miRNA与目的基因配对不完全时，miRNA就以抑制目的基因的表达发挥作用；miRNA与目的基因某段序列配对完全时，就可能引起目的基因在互补区断裂从而使得基因沉默。另外，miRNAs有时候也导致组氨酸修饰和启动子区的DNA甲基化，从而影响靶基因的表达。

鉴于现有技术，探寻与肝癌有关的miRNA，从而为临床上判断和治疗提供技术支持。

发明内容

本发明目的在于提供miR-30a-3p的应用。

为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提出了定量检测miRNA-30a-3p表达量的试剂在制备诊断或辅助诊断肝癌试剂盒中的应用，所述诊断或辅助诊断包括：1)通过所述定量检测miRNA-30a-3p表达量的试剂，测定来自受试者的样品中miRNA-30a-3p的表达水平；2)根据受试者miRNA-30a-3p与正常肝细胞的表达水平差异，确定受试者是否患有肝癌。发明人发现，miR-30a-3p及其对应靶基因COX-2在肝癌中表达显著，可作为肝癌的标志基因。

根据本发明的实施例，如果与对照相比，miRNA-30a-3p表达水平显著降低，则确定所述受试者患有肝癌。

根据本发明的实施例，所述定量检测miRNA-30a-3p表达量的试剂为定量检测miRNA-30a-3p表达量的引物。

根据本发明的实施例，所述引物的核苷酸序列为：

上游引物miR-30a-3p-F：ACACTCCAGCTGGGCTTTCAGTCGGATGTT；

下游引物miR-30a-3p-R：TGGTGTCGTGGAGTCG。

本发明第二方面，提出了一种预诊断或辅助诊断肝癌的芯片，所述芯片包括固相载体，以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针；所述寡核苷酸探针包括特异对应前面所述的定量检测miRNA-30a-3p表达量的序列。