[发明专利]一种高耐镉菌株及其分离筛选方法在审
申请号: | 202010185252.1 | 申请日: | 2020-03-17 |
公开(公告)号: | CN111925950A | 公开(公告)日: | 2020-11-13 |
发明(设计)人: | 李文;王陶;陈银元 | 申请(专利权)人: | 徐州工程学院 |
主分类号: | C12N1/16 | 分类号: | C12N1/16;C12N1/02;C12R1/645 |
代理公司: | 合肥律众知识产权代理有限公司 34147 | 代理人: | 邓盛花 |
地址: | 221000 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 高耐镉 菌株 及其 分离 筛选 方法 | ||
1.一种高耐镉菌株,其特征在于:所述菌株于2018年05月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC),菌种保藏号为GDMCC No:60378,其26S rDNA序列是序列表SEQ NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种高耐镉菌株,其特征在于:所述菌株在固体培养基中最大耐受镉的浓度为22000mg/L,液体培养基中最大耐受镉的浓度为18000mg/L。
3.根据权利要求1或2所述的一种高耐镉菌株的分离筛选方法,其特征在于:包括以下具体步骤:
(1)菌株的分离纯化,选取多种重金属污染土壤样品制成土壤悬液,取上清液均匀涂布到含100mg/L氯化镉的固体纯化培养基,分别挑取单个菌落,采用平板划线分离法将菌落分别种到镉浓度为100、150、200mg/L的固体培养基中将耐镉能力最强的菌落选出,对其单菌落连续4次采用平板划线分离法进行纯化;
(2)高耐镉菌株的筛选,将纯化所得菌株依次接种到含镉浓度分别为250-24000mg/L的系列浓度梯度的同种筛选培养基上,室温下进行培养,挑选出抗高浓度镉的菌株,得到本发明的高耐镉菌株,其编号为QN-3。
4.根据权利要求3所述的一种高耐镉菌株的分离筛选方法,其特征在于:所述土壤悬液的具体制备步骤为:将土壤样品与无菌水按照1:10的重量比进行混合,在室温条件下150r/min振荡30min后静置10min。
5.根据权利要求3所述的一种高耐镉菌株的分离筛选方法,其特征在于:所述固体纯化培养基包括以下组分:葡萄糖15g,酵母提取物5g,选矿黑药2g,选矿黄药4g,七水硫酸镁3mL,硫酸铵2mL,氯化钾4mL,硫酸锰0.3g,琼脂20g,溴酚蓝6mL。
6.根据权利要求3所述的一种高耐镉菌株的分离筛选方法,其特征在于:所述筛选培养基为PDA固体培养基或PDA液体培养基,具体包括以下组分:蔗糖20g,琼脂20g,马铃薯200g,纯水1000mL,氯化镉浓度梯度100mg/L,200mg/L,250mg/L,300mg/L,400mg/L,500mg/L,600mg/L,700mg/L,800mg/L,900mg/L,1000mg/L,1600mg/L,1800mg/L,2000mg/L,2200mg/L,2400mg/L,2500mg/L,2600mg/L,4000mg/L,6000mg/L,8000mg/L,10000mg/L,11000mg/L,12000mg/L,13000mg/L,14000mg/L,15000mg/L,16000mg/L,17000mg/L,18000mg/L,19000mg/L,20000mg/L,22000mg/L,24000mg/L。
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