[发明专利]一种提取牛奶中κ-酪蛋白的方法及其产品

说明书

本发明涉及了一种提取牛奶中κ‑酪蛋白的方法及其产品，利用牛乳中α‑酪蛋白、β‑酪蛋白和κ‑酪蛋白三种酪蛋白对Ca²⁺及pH的敏感性差异，设定不同的工艺参数，经过尿素溶液拆解剂溶解、酸性沉淀、Ca²⁺沉淀等操作后，将三种酪蛋白进行分离，并得到κ‑酪蛋白，从已知AA‑κ‑酪蛋白或BB‑κ‑酪蛋白类型的牛乳中提取出纯度高的κ‑酪蛋白单体可作为用于高效液相色谱法检测的AA‑κ‑酪蛋白或BB‑κ‑酪蛋白标准化单体商品，该方法操作简单，成本低。

技术领域

本发明涉及了牛奶中分离提取蛋白质技术领域，特别涉及了一种提取牛奶中κ-酪蛋白的方法及其产品。

背景技术

牛乳中蛋白质主要有乳清蛋白和酪蛋白，其中酪蛋白由α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白组成，三种酪蛋白进一步细分又可以分成不同的构型。其中牛乳按照κ-酪蛋白类型可分为AA-κ-酪蛋白、BB-κ-酪蛋白及两种构型的混合型牛乳。目前有文献资料证实，只含有BB-κ-酪蛋白的牛乳能提升奶酪的产量，另外两种κ-酪蛋白均存在糖基化结构，糖基化的κ-酪蛋白经过胃蛋白酶水解后生产糖巨肽，糖巨肽具有提升免疫力生理活性，因此鉴定牛乳中κ-酪蛋白的类型对于牛乳生产是很有必要的。

对于牛的基因型鉴定可以通过PCR方法进行检测，PCR检测对于基础硬件及操作人员要求比较高，大多数乳企不具备检测方法所需条件，而且PCR方法难以对未知牛乳进行判断。

利用现有技术中高效液相色谱仪对牛乳中酪蛋白定性、定量检测是最方便快捷的，但是检测过程中需要较高纯度的AA-κ-酪蛋白或BB-κ-酪蛋白，目前市售的κ-酪蛋白是AA和BB-κ-酪蛋白的混合体，不属于单体的标准化商品，因此急需一种从牛乳中提取κ-酪蛋白单体的方法，而且最好是操作简单，成本低的方法。

发明内容

本发明的目的在于：针对现有技术中存在的提取得到的κ-酪蛋白单体纯度低，不适合用于高效液相色谱法检测的AA-κ-酪蛋白或BB-κ-酪蛋白标准化单体的技术问题，提供了一种从牛奶中提取κ-酪蛋白单体的方法及其产品，该方法操作简单，成本低，产物纯度高。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种提取牛奶中κ-酪蛋白的方法，包括以下步骤：

步骤1、将从牛乳中提取出来的酪蛋白粗品，加入尿素溶液中，碱液调节pH值为9-10，升温至40-45℃，搅拌溶解，然后常温下搅拌2-3h后降温至2-6℃，静置1-2h。

步骤2、冰水浴条件下，用酸液调节步骤1得到的物料pH至5.0±0.2，离心收集沉淀，纯水洗沉淀至少一次，得到第一沉淀物。

步骤3、取适量pH值为11±0.2的碱液，升温至40-45℃之间，加入步骤2得到的第一沉淀物，搅拌溶解，溶解过程中用碱液调节pH值为10.0±0.2，然后调节pH值至中性，加入可溶性钙盐溶液，使最终溶液中Ca²⁺离子浓度达到0.08mol/L～0.12mol/L，离心收集上清液。

步骤4、酸液调节步骤3得到的上清液pH至4.0±0.2，离心收集沉淀，纯水洗沉淀至少一次，得到κ-酪蛋白。

本发明利用牛乳中α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白三种酪蛋白对Ca²⁺及pH的敏感性差异，设定不同的工艺参数，经过尿素溶液拆解剂溶解、酸性沉淀、Ca²⁺沉淀等操作后，将三种酪蛋白进行分离，并得到κ-酪蛋白，从已知AA-κ-酪蛋白或BB-κ-酪蛋白类型的牛乳中提取出纯度高的κ-酪蛋白单体。所得κ-酪蛋白单体可作为用于高效液相色谱法检测的AA-κ-酪蛋白或BB-κ-酪蛋白类型所需的标准化单体。本发明提取方法操作简单，成本低。