[发明专利]一种巴氏染色液EA50及其制备方法

说明书

本发明公开了一种巴氏染色液EA50及其制备方法，每1000ml巴氏染色液EA50中，包括以下组分：亮绿0.15g‑0.4g，水溶性伊红3g‑5g，甲醇200ml‑300ml，冰醋酸10ml‑50ml，磷钨酸2g‑5g，醇溶性伊红0.05g‑0.1g，无水乙醇450ml‑800ml，其余为纯水。本发明提供的一种巴氏染色液EA50通过对传统的EA50染液配制方法的改良，达到了比较理想的染色效果及使用时间，放弃了易对环境造成污染的碳酸锂溶液，延长了EA50染液的保存时间，缩短了EA50的染色时间，有效地降本增效。

技术领域

本发明涉及细胞染色技术领域，尤其涉及一种巴氏染色液EA50及其制备方法。

背景技术

巴氏染色是一种经典的细胞化学染色方法，广泛应用于细胞脱落学、病理学等领域，染色效果显著。但是在实际操作过程中步骤繁琐、试剂配制麻烦且容易过期、干扰因素多等缺点。EA50染液作为巴氏染色主要的染液之一，主要是使细胞浆、肌纤维、胶元纤维等染成蓝绿色、淡蓝或淡绿色、粉红色或桔黄色等不同的颜色，适用于妇科细胞学涂片染色，如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液等非妇科细胞样本的染色。

传统的巴氏染液染色不均，染色效果不稳定，镜下团状细胞无法分辨，细胞核结构无法分辨，影响疾病的判断。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种巴氏染色液EA50及其制备方法，改良了传统的EA50染液配制方法，达到了比较理想的染色效果及使用时间。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面提供了一种巴氏染色液EA50，每1000ml巴氏染色液EA50中，包括以下组分：亮绿0.15g-0.4g，水溶性伊红3g-5g，甲醇200ml-300ml，冰醋酸10ml-50ml，磷钨酸2g-5g，醇溶性伊红0.05g-0.1g，无水乙醇450ml-800ml，其余为纯水。

本发明的第二方面是提供该巴氏染色液EA50的制备方法，包括如下步骤：

S1制备试剂甲：称取一定量的亮绿溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使亮绿的浓度为0.03g/ml；

S2制备试剂乙：称取一定量的水溶性伊红溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使水溶性伊红的浓度为0.2g/ml；

S3制备试剂丙：称取一定量的醇溶性伊红溶于无水乙醇中，混合并搅拌直至充分溶解，使醇溶性伊红的浓度为0.008g/ml；

S4制备试剂丁：称取一定量的磷钨酸溶于纯水中，混合并搅拌直至充分溶解，使磷钨酸的浓度为1g/ml；

S5制备试剂戊：量取无水乙醇和纯水，混合均匀，配制成95％的乙醇溶液；

S6将试剂甲5-10毫升和试剂乙10-16毫升混合并搅拌10秒钟；

S7加200-240毫升甲醇，搅拌15秒钟；

S8加入500-800毫升试剂戊，搅拌10秒钟；

S9加入2.5-3.8毫升试剂丁搅拌20秒钟；

S10加入10.0-16.0毫升冰醋酸，搅拌20秒钟；

S11加入5.0-10.0毫升试剂丙，搅拌25秒钟。

进一步地，试剂甲的体积为5ml，8ml或10ml。

进一步地，试剂乙的体积为10ml，12ml或16ml。

进一步地，试剂丙的体积为5ml，8ml或10ml。

进一步地，试剂丁的体积为2.5ml，3.0ml或3.8ml。