[发明专利]粘蛋白1检测的荧光生物探针、传感器及用途和检测方法

权利要求书

1.一种用于粘蛋白1检测的荧光生物探针，其特征在于，包括适体探针和发夹探针；

所述适体探针由序列P1、P2和P3自组装而成；

所述序列P1由5’端到3’端依次包括序列a、序列b和至少2个序列c；

所述序列P2由5’端到3’端依次包括序列a、序列b和与序列c碱基互补的序列c*；

所述序列P3由5’端到3’端依次包括与序列b碱基互补的序列b*，和与序列a碱基互补的序列a*；所述序列P3是靶标的适体序列，能够特异性结合靶标；

所述序列P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述序列P2的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；所述序列P3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述发夹探针包括发夹探针H1和发夹探针H2；

所述发夹探针H1由5’端到3’端依次包括序列b*，序列a*，形成环区域的序列d，与序列a*碱基互补形成茎干区的序列a，以及可以与荧光基团结合的序列e；

所述发夹探针H2由5’端到3’端依次包括可以与荧光基团结合的序列e，序列a，形成环区域的序列b，与序列a碱基互补形成茎干区的序列a*，以及与序列d碱基互补的序列d*；

所述发夹探针H1的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；和所述发夹探针H2的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.根据权利要求1所述的荧光生物探针，其特征在于，所述序列a、序列b、序列d、序列e、序列a*、序列b*和序列d*包含12-13个碱基。

3.根据权利要求2所述的荧光生物探针，其特征在于，

所述序列e为包含12个胞嘧啶碱基的序列。

4.根据权利要求2所述的荧光生物探针，其特征在于，所述序列e结合的荧光基团为AgNCs。

5.一种制备如权利要求1-4任一项所述的用于粘蛋白1检测的荧光生物探针的方法，其特征在于，包括适体探针的制备方法，包括如下步骤：

将所述序列P1、P2和P3按照摩尔比1：2：3混合于孵育体系中孵育。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包括荧光发夹探针的制备方法，包括如下步骤：

将所述发夹探针H1、H2分别于反应体系中加温至90-95℃，保持5-10分钟，缓慢冷却至室温，以形成发夹结构，随后结合荧光基团。

7.一种用于粘蛋白1检测的荧光生物传感器，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的荧光生物探针和权利要求5或6制备的用于粘蛋白1检测的荧光生物探针。

8.权利要求1-4任一项所述的荧光生物探针、权利要求5或6制备的用于粘蛋白1检测的荧光生物探针和权利要求7所述的用于粘蛋白1检测的荧光生物传感器在生物靶标检测中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的生物靶标包括粘蛋白1。

10.一种粘蛋白1的荧光检测方法，其特征在于，包括利用权利要求1-4任一项所述的荧光生物探针、权利要求5或6的制备方法制备的用于粘蛋白1检测的荧光生物探针和权利要求7所述的用于粘蛋白1检测的荧光生物传感器。

11.根据权利要求10所述的荧光检测方法，其特征在于，包括：

S1、将待测蛋白与适体探针于反应体系中孵育，然后加入Exo I液，继续孵育，得扩增反应液，将扩增反应液中的Exo I失活，备用；

S2、将荧光发夹探针AgNCs-H1和AgNCs-H2加入至步骤S1得到的扩增反应液中，振摇，避光孵育，随后加入GO溶液，室温静置。

12.根据权利要求11所述的荧光检测方法，其特征在于，在S1步骤中，第一次孵育的温度为37℃，孵育时间为10-20分钟，第二次孵育的温度为37℃，孵育时间为30-40分钟。