[发明专利]一种肝硬化腹水动物模型及其构建方法

说明书

本发明涉及一种肝硬化腹水动物模型。所述的动物模型是通过以下方法制备得到：大鼠体重达到220g以后开始造模，用0.5％DMN溶液，按0.2ml/100g大鼠体重腹腔注射，每周周三、四、五各给药一次，其余周六、日、一、二均不予干预，共注射4周，前两周按原剂量注射，注射第三周开始根据大鼠体重调节给药量，调整幅度，根据以下方案：体重没有改变或减少小于10克，使用原剂量给药；体重减少10‑30克使用75％的原剂量；体重减少31‑50克使用50％的原剂量；体重下降超过50g时候，暂停注射一次，1周后剂量根据体重变化进行调整。本发明成功的通过方案的改良，成功的制备出稳定、可复制、操作性强的肝硬化腹水大鼠模型。为以后的肝硬化腹水动物实验打下基础。

技术领域

本发明涉及动物模型技术领域，具体地说，是关于一种肝硬化腹水动物模型及其构建方法。

背景技术

目前肝硬化腹水动物模型的制备最常见的方法有四氯化碳(CCL4)造模法(含单用CCL4和联用苯巴比妥、乙醇、改良饮食等综合制备方法)，酒精性造模法、免疫造模法、胆总管结扎诱导法和化学致癌物诱导法(DMN造模法)。其中，CCL4造模法是最早、最经典的造模方法。本法的主要作用机制是是氧化应激反应，通过细胞色素P450将CCL4分解为三氯甲基和三氯甲基自由基，导致肝细胞脂质过氧化，引起细胞膜的变性损伤，变性坏死，因肝细胞本身具有修复功能，经过不断的损伤-修复-损伤的过程，最终发展为肝硬化。但本法造模周期长，死亡率高。酒精性造模法主要机制是，一方面酒精在肝内氧化代谢产生乙醛，直接具有肝细胞毒性，另一方面，酒精可激发体内免疫反应系统，诱发组织炎症反应，启动组织肝纤维程序。最终若不戒断酒精，则导致肝脏病变进一步加重。酒精性造模法，操作简单，费用低廉，可以辅助诸如四氯化碳法，减少造模周期，但是因动物拒绝饮用酒精，且酒精可致动物因缺水、电解质紊乱甚至脱水而死，故而存在缺陷。免疫造模法采用异体血清反复注射动物，产生机体变态反应，大量免疫复合物沉积，从而产生肝纤维化，其后继续随着病程发展肝硬化。但是本法造模时间长，死亡率高，且大鼠具有一定的自愈倾向。胆总管结扎法可以引起动物模型胆管扩张、肝内胆汁淤积，也可引发肝内胆小管扩张破裂，使肝细胞(hepaticcells)缺血坏死，慢慢进展为胆汁淤积型肝硬化。与人原发性胆汁性肝硬化发展有一定类似之处，但是手术操作难度大，对肝组织学影响较小，大鼠死亡率高，也有一定自愈倾向。化学致癌物诱导法中以DMN诱导最为常见，DMN具有肝毒性、基因毒性和免疫毒性。DMN毒性发挥有赖于体内代谢的激活产生，经微粒体转化形成强烷化物可造成细胞内大分子损伤，诱发大鼠肝窦壁肝星状细胞(HSC)的活化，转化成肌层纤维细胞样细胞。HSC的激活一方面参与肝内结构的重建和肝纤维化的形成；另一方面使肝窦内压升高。故而，本法主要用于肝纤维化、肝硬化形成和门脉高压机制以及肝癌的研究。缺陷：因DMN试剂的剧毒性及剂量的难以把握而致的造模动物死亡率较高，因此剂量的把握尤为重要。

发明内容

本发明的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供一种肝硬化腹水动物模型。

本发明的第二个目的是，提供一种肝硬化腹水动物模型的构建方法。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：一种肝硬化腹水动物模型，所述的肝硬化腹水动物模型是通过以下方法制备得到：大鼠体重达到220g以后开始造模，用0.5％DMN溶液，按0.2ml/100g大鼠体重腹腔注射，每周周三、四、五各给药一次，其余周六、日、一、二均不予干预，共注射4周，前两周按原剂量注射，注射第三周开始根据大鼠体重调节给药量，调整幅度，根据以下方案：体重没有改变或减少小于10克，使用原剂量给药；体重减少10-30克使用75％的原剂量；体重减少31-50克使用50％的原剂量；体重下降超过50g时候，暂停注射一次，1周后剂量根据体重变化进行调整。