[发明专利]一种CRISPR-based核酸检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种CRISPR‑based核酸检测试剂盒及SHERLOCK CRISPR系统在病原体检测中的应用，所述的核酸检测试剂盒包括针对病原体的gRNA序列。本发明的试剂盒及检测方法快速准确、灵敏度高、便携、方便运输、可实现冷冻运输，价格低廉，整个检测时间在2小时以内；检测的准确性与PCR平台一致；检测灵敏度在1‑1000copies/μl；从而使其能够大规模推广应用，能够在疫情爆发初期对当地居民，特别是落后地区的居民，实现实时实地的快速检测，最大程度遏止病毒的传播。

技术领域

本发明具体涉及一种CRISPR-based核酸检测试剂盒及其应用。

背景技术

目前肺炎病原体的检测主要依靠PCR技术及其他以PCR为基础的技术，PCR相关检测技术存在快速准确、灵敏度高等优点，因此是最常用的病毒检测方法，也是目前病毒检测的金标准。但是，目前主流的PCR检测平台，都需要专业的仪器设备和相关技术人员，限制了其大规模推广应用，特别是在边远落后地区的应用。例如，近期在武汉爆发的新型冠状病毒，具有极强的传染性和致病性，严重威胁人类的生命和财产安全。目前对于新型冠状病毒及其他病毒的检测，主要依靠PCR技术及其他以PCR为基础的技术。而由于PCR，需要专业的设备和相关技术人员，检测费用相对较高，因此，在落后地区无法使用，导致某些地区新冠的确诊难度增大，不利于疫情的控制

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种CRISPR-based核酸检测试剂盒及其应用，该试剂盒基于CRISPR核酸检测技术。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

本发明一方面提供一种CRISPR-based核酸检测试剂盒，所述的核酸检测试剂盒包括针对病原体的gRNA序列。

优选地，所述的病原体包括肺炎病原体。

优选地，所述的病原体包括新型冠状病毒COVID-19以及其他病毒。

优选地，所述的核酸检测试剂盒包括针对一种或多种病原体设计的gRNA序列。

优选地，所述的核酸检测试剂盒包括针对每种病原体的一个或多个基因设计的一个或多个gRNA序列。

优选地，所述的核酸检测试剂盒还包括Cas13a蛋白和/或探针。

本发明的第二方面提供一种SHERLOCK CRISPR系统在病原体检测中的应用，检测时采用所述的CRISPR-based核酸检测试剂盒。

本发明的第三方面提供一种利用SHERLOCK CRISPR系统及所述的CRI SPR-based核酸检测试剂盒进行病原体检测的方法，包括如下步骤：

(1)对待测样本进行预处理；

(2)通过RPA扩增及转录；

(3)加入Cas13a蛋白、gRNA序列以及探针进行检测。

优选地，进行所述的检测时，采用酶标仪检测荧光信号，或者，基于链霉亲和素反应进行检测。

优选地，所述的待测样本为体液。

本发明的试剂盒和检测方法对仪器的依赖程度低，甚至可以实现无需仪器的试纸条检测。

由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明的试剂盒及检测方法快速准确、灵敏度高、便携、方便运输、可实现冷冻运输，价格低廉，整个检测时间在2小时以内；检测的准确性与PCR平台一致；检测灵敏度在1-1000copies/μl；从而使其能够大规模推广应用，能够在疫情爆发初期对当地居民，特别是落后地区的居民，实现实时实地的快速检测，最大程度遏止病毒的传播。

具体实施方式