[发明专利]一种脂肪细胞靶向的DNA纳米药物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种脂肪细胞靶向的DNA纳米药物及其制备方法与应用，该药物由脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM和单宁酸通过氢键、Π‑Π堆积和范德华力结合而成；脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM和单宁酸的质量比为1:25～30。本发明的DNA纳米药物中包含有DNA框架结构TDM和单宁酸，单宁酸负载DNA框架结构TDM上；DNA框架结构TDM包括有脂肪细胞靶向的核酸适配体序列，对脂肪细胞有很好的靶向性，可以特异性的进入脂肪细胞，而单宁酸具有很好的抗氧化和抗炎能力，因而两者结合后，可以特异性的进入脂肪细胞，因而对可以肥胖组织处氧化还原态失衡和慢性炎症环境进行重新修复，阻断肥胖细胞和免疫细胞之间的炎症信号通路，从而达到治疗肥胖、抑制其他并发症产生的目的。

技术领域

本发明属于生物纳米药物技术领域，具体涉及一种脂肪细胞靶向的DNA纳米药物及其制备方法与应用。

背景技术

肥胖已被世界卫生组织认定为世界上最严重的公共卫生疾病。它不仅影响人民生活质量，更是诱导各类重大疾病产生的重要因素。目前，对于肥胖的临床治疗策略及临床前研究主要通过控制人体能量摄取、吸收以及机体的新陈代谢等途径进行的。但是，这些策略的治疗效果欠佳，且存在明显的个体差异性。同时，绝大多数抗肥胖药物常常引起严重的副作用，从而导致治疗的失败，甚至威胁到患者的生命安全。因此，发展安全、有效的、通用的肥胖及其并发症的治疗策略对于提高患者生活质量，降低重大疾病产生风险具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种安全稳定、尺寸可调，且具有抗氧化和抗炎作用脂肪细胞靶向的DNA纳米药物及其制备方法与应用。

本发明这种脂肪细胞靶向的DNA纳米药物，由脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM和单宁酸通过氢键结合而成；脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM和单宁酸的质量比为1:25～30。

所述的脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM平均尺寸为1～2μm。

所述的脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM，包含如序列1所示的DNA序列，该序列通过特定结构的堆积形成DNA框架结构TDM。

本发明这种脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM的制备方法，包括以下步骤：

1)连接：包含有脂肪细胞核酸适配体靶向序列的磷酸化DNA模板(如序列2所示)和引物(如序列3所示)混合于DNA连接酶缓冲液中，进行退火处理，退火之后的产物与EcoliDNA连接酶进行连接反应，形成环化的DNA模板；

2)聚合：将步骤1)中环化的DNA模板与phi29 DNA聚合酶、dNTP和BSA在聚合酶缓冲液中进行聚合反应，反应结束后，反应混合物在设定温度加热终止聚合反应，反应产物洗涤后，得到脂肪细胞靶向的DNA框架结构TDM。

所述步骤1)中，磷酸化DNA模板浓度为8～12μM，引物的浓度为8～12μM，DNA连接酶缓冲液由5mM Tris-HCl、1mM MgCl₂、0.1mM ATP和1mM二硫苏糖醇组成，Ecoli DNA连接酶的浓度为50～70U/μL，四者的体积比为(2～4):(5～7):(30～60):(7～9)；退火具体工艺参数为：95℃下保持5min，然后在2h之内缓慢降温至室温，连接反应温度为16℃，反应时间为3h。

所述步骤2)中，环化的DNA模板的浓度为0.5～0.7μM，phi29 DNA聚合酶的浓度为8～12U/μL，BSA的浓度为(0.04～0.06)％，聚合酶缓冲液由50mM Tris-HCl、10mM(NH₄)₂SO₄、10mM MgCl₂和4mM二硫苏糖醇组成，四者混合的体积比为(45～55):(15～25):(0.5～1.5):(95～105)；聚合反应温度为28～32℃，聚合反应时间为18～30h，设定温度为70～80℃，加热时间为8～12min。