[发明专利]一种结核分枝杆菌免疫原蛋白ESAT6的制备方法

权利要求书

1.一种结核分枝杆菌免疫原蛋白ESAT6的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的CFP10-ESAT6重组融合蛋白依次经过镍柱亲和层析、层析除盐和阴离子交换层析进行纯化；

S2.将步骤S1纯化后的重组融合蛋白用蛋白酶TEV酶切，镍柱分离，收集流穿；

S3.将步骤S2得到的流穿用1％～3％曲拉通处理后，洗脱，即得所述免疫原蛋白ESAT6。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1所述镍柱亲和层析所用的洗涤缓冲液包括10～50mM Tris-HCl和50～80mM咪唑；步骤S1所述镍柱亲和层析所用的洗脱缓冲液包括10～50mM Tris-HCl和250～300mM咪唑。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1所述阴离子交换层析所用的洗脱缓冲液包括10～50mM Tris-HCl和0～0.5M NaCl。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3所述洗脱为：经第一平衡缓冲液和第二平衡缓冲液淋洗后，用洗脱缓冲液洗脱。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一平衡缓冲液包括10～50mMTrisHCl和1％～3％曲拉通；所述第二平衡缓冲液为10～50mM Tris-HCl；所述洗脱缓冲液包括10～50mM Tris-HCl和250～300mM咪唑。