[发明专利]叶酸-壳聚糖-纳米硒肿瘤靶向载药体系及其制备方法

说明书

本发明公开了一种叶酸‑壳聚糖‑纳米硒肿瘤靶向载药体系及其制备方法，该靶向载药系统是由叶酸、壳聚糖、纳米硒三种成分组成，通过活化叶酸，将叶酸与壳聚糖结合后作为稳定剂和包覆剂，再与纳米硒结合，形成具有肿瘤靶向作用的叶酸‑壳聚糖‑纳米硒载药体系。本发明制备的靶向载药体系平均粒径小，粒径分布均匀，性质稳定，方法易于实现，操作简单，可重复性强。

技术领域

本发明涉及靶向纳米技术领域，具体涉及一种叶酸-壳聚糖-纳米硒肿瘤靶向载药体系及其制备方法。

背景技术

据国家癌症中心统计，我国每年新发恶性肿瘤病例超350万，死亡病例超200万，其中，肺癌、乳腺癌、胃癌等是最常见的恶性肿瘤。随着肿瘤分子机制研究的深入，肿瘤受体引起广泛关注。叶酸受体在正常细胞中表达高度保守，而在大部分恶性肿瘤细胞中高度表达，利用叶酸受体进行肿瘤靶向治疗是有效手段。在生理条件下，抗肿瘤药物在水溶液中的溶解度较低，将叶酸直接偶联药物分子后，会更加降低药物在极性溶液中的溶解度，从而降低药物生物利用度。因此，寻找恰当的叶酸与药物偶联方式以提高生物利用度具有极为重要的应用价值。纳米技术是提高药效的有效手段，但传统纳米粒子（NPs）进入体内后大部分迅速被网状内皮系统吞噬，使到达肿瘤细胞的纳米粒子数量减少，降低了药效，这极大限制了纳米粒子在医药领域中的研究和应用。叶酸这一靶向分子与纳米技术结合可以作为提高生物利用度的有效方式。

此外，硒（Se）可以提高化疗药物治疗效果，降低化疗药物毒副作用及肿瘤的耐药性。但现有资料表明，无机硒在超营养水平和大剂量时才有明显效果，但这些剂量接近硒毒性水平，使用时剂量难以控制。

一般认为，只有离子态硒具备生物活性和毒性，零价态的硒没有活性。与一般的零价硒相比，纳米硒的物理性质和化学性质发生了显著改变，能够被人体所吸收和利用，并且能发挥无机硒和有机硒特有的功能。但纳米硒性质不稳定，极易转化为热稳定但活性钝化的灰色或黑色单质硒。

壳聚糖（CS）作为天然高分子材料，可以通过活化免疫系统发挥抗肿瘤活性，具有良好的生物可降解性和生物相容性，这些独特的性质使其可以作为理想的纳米粒子载体。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种叶酸-壳聚糖-纳米硒肿瘤靶向载药体系及其制备方法，通过此方法制备的靶向载药体系平均粒径小，粒径分布均匀，性质稳定，制备方法易于实现，操作简单，可重复性强。

本发明的技术解决方案是：该叶酸-壳聚糖-纳米硒肿瘤靶向载药体系，通过N-羟基琥珀酰亚胺和二亚胺盐酸盐活化叶酸；利用酰基化反应合成叶酸-壳聚糖，并使用透析法进行纯化；通过抗坏血酸还原亚硒酸钠制备纳米硒，将纳米硒与叶酸-壳聚糖结合，最终形成纳米靶向载药体系。

其中，所述的叶酸-壳聚糖-纳米硒肿瘤靶向载药体系的制备方法包括以下步骤：

（a）叶酸（FA）的活化：精确称取叶酸1.0g~2.0g溶于60~120mL二甲基亚砜，室温下搅拌使其完全溶解；加入0.2g~0.4g N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）和0.2g~1.2g碳化二亚胺盐酸盐（EDC·HCl）混合均匀；再加入三乙胺2mL~10mL；将其置于室温环境下，避光反应24h~48h，得到活化叶酸；

（b）叶酸-壳聚糖（FA-CS）体系的构建：称取壳聚糖溶于质量浓度1%乙酸溶液，得到质量浓度5%~15%壳聚糖储备液；将制得的壳聚糖储备液缓缓滴入步骤（a）制备的活化叶酸中，将其置于40℃~70℃水浴锅中反应12h~48h，调节体系pH至9.0终止反应；其中，活化叶酸与壳聚糖的质量比为1:1~2:1，以上过程均应避光；